四倍體苜蓿體細胞胚胎發(fā)生及抗寒基因CBF1轉化的研究.pdf

1、中山大學碩士學位論文y7 6 6 6 8 S四倍體苜蓿體細胞胚胎發(fā)生及抗寒基因C B F l 轉化的研究學位論文答辯委員會作者：陳云鳳導師：黃學林教授號業(yè)： 植物學中山入學生命科學學院，廣州5 1 ( ) 2 7 52 0 0 5 年3 月器髂，4 。稈L 乒 主委陳云風 中山大學碳士學位論文 中文摘要 2 0 0 5 年3通過以上的研究，建立了一個較穩(wěn)定的間接體胚發(fā)生體系。合適的外植體是第二片和第三片復葉的葉柄。其愈傷組織誘導和繼代培

2、養(yǎng)基是B s h 基本培養(yǎng)基，附加4 ．7t t m o l ／L 2 ，4 ．D ，0 ．9 3 6 l a m o l ／L K T , 3 ％蔗糖，0 ．7 ％瓊脂粉，p H5 ．5 ；體胚誘導培養(yǎng)基是S H 液體培養(yǎng)基，附加4 ．7 u m o l ／L 2 ，4 - D ，O ．5 4 um o l ／L N A A ，3 ％蔗糖，p H 5 ．5 ；體胚發(fā)育培養(yǎng)基是S H 液體培養(yǎng)基，附加3 ．4 5 9 ／L L - 脯氨

3、酸，1 ．6 5 9 ／L 硫酸氨，3 ％麥芽糖，p H 5 , 8 。所有培養(yǎng)階段的培養(yǎng)條件是2 5 。C ，1 6 ／8 h 光照。在體胚誘導和發(fā)育期，懸浮培養(yǎng)的轉速是1 0 0 r p m 。以四倍體菖蓿的體胚切塊為轉化受體，以含有C a M V 3 5 S 啟動子調控下的C B 幾基因的質粒雙元載體p B P C B F l 為表達載體并導入L B A 4 4 0 4 ，初步研究了C B F l 基因的農桿菌介導的轉化。實驗共轉