27302.仙客來體細胞胚胎發(fā)生、發(fā)育及serk基因在體細胞胚性轉化過程的表達特性

1、中國海洋大學博士學位論文仙客來體細胞胚胎發(fā)生、發(fā)育及SERK基因在體細胞胚性轉化過程的表達特性姓名：由翠榮申請學位級別：博士專業(yè)：細胞生物學指導教師：樊廷俊20090601結果表明，胚性和非胚性愈傷組織中均含有不同大小的細胞和細胞團。兩種胚性愈傷組織細胞中均含有胚性細胞和非胚性細胞，但數(shù)量上存在明顯的差異。松軟胚性愈傷組織多為含有數(shù)十個胚性細胞的胚性細胞團，而松脆胚性愈傷組織中的胚性細胞團胚性細胞數(shù)目只有幾個或十幾個，且在隨機選取的相同

2、視野中胚性細胞團的數(shù)量前者明顯多于后者。通過連續(xù)的活體細胞追蹤觀察發(fā)現(xiàn)，胚性細胞團起源于胚性母細胞。一個胚性母細胞通過持續(xù)分裂形成包含有幾個或十幾個胚性細胞的胚性細胞團，而包含有幾十個胚性細胞的胚性細胞團來源于成團存在的幾個胚性母細胞。對體細胞胚胎發(fā)生和發(fā)育整個過程進行了細胞和組織學追蹤，結合活體細胞和石蠟包埋切片技術顯微觀察結果表明，該培養(yǎng)體系的體細胞胚胎屬于單細胞發(fā)生體系。體細胞胚的發(fā)生起源于胚性細胞團表面的單個胚性細胞，經歷了二分

3、體、四分體、八分體、多細胞原胚、球形胚、心形胚和魚雷胚等時期，發(fā)育成完整植株。仙客來體細胞胚發(fā)育植株再生方式有兩種：第一種為胚性細胞經多細胞原胚、球形胚、心形胚和魚雷胚再生為小植株；第二種再生方式為球形胚不經過魚雷胚而發(fā)育先形成球莖，然后是根或芽的形成，最后形成一完整植株。利用組織化學切片技術對體細胞胚發(fā)生和發(fā)育過程中淀粉的代謝進行了動態(tài)跟蹤觀察。結果顯示在體細胞胚胎整個發(fā)生發(fā)育期內出現(xiàn)了4個淀粉粒積累的高峰期，分別為胚性細胞期、球形胚

4、期、早期魚雷胚期和體細胞胚再生為小植株的球莖和不定芽的發(fā)育期，淀粉的積累和消減與體細胞胚的發(fā)生、發(fā)育密切相關。為進一步研究高頻率體胚體系，以再生胚胎為外植體，采用上述的胚性愈傷組織繼代培養(yǎng)基I／2MS2，4D2mgLq6一BA02mgL1和I／2MS2，4D2mgL12iP02mgL_使其重新脫分化，初培養(yǎng)25—28d即成功誘導獲得了胚性愈傷組織。在無激素的基本培養(yǎng)基上促使體細胞胚的發(fā)育，實驗結果表明，除小球形胚外，以不同再生胚胎為外植