取材時期對水曲柳合子胚外植體體細胞胚胎發(fā)生的影響.pdf

1、水曲柳(FraxinusmandshuricaRupr.)為木犀科白蠟樹屬的落葉喬木，是東北林區(qū)珍貴的3大硬闊葉樹種之一，同時也是我國東北地區(qū)重要的用材樹種和園林綠化樹種。本研究以不同取材時期水曲柳合子胚的子葉為外植體誘導體細胞胚胎發(fā)生，確立合子胚的最佳取材時期，并對體細胞胚的成熟、萌發(fā)、生根的影響因素如培養(yǎng)基的種類、激素的濃度和種類以及蔗糖和瓊脂的濃度等進行了探討，探索了體細胞胚萌發(fā)到實現(xiàn)正常轉株的可能性途徑。首次在有關水曲柳體細胞胚

2、胎發(fā)生研究的基礎上針對取材時期這一影響因素進行系統(tǒng)的研究，逐步完善體細胞胚胎發(fā)生體系，為實現(xiàn)植株再生奠定基礎。研究結果如下： (1)取材時期是水曲柳合子胚體細胞胚胎發(fā)生的關鍵影響因素之一。7月中旬(授粉后大約9周)取材的未成熟合子胚其體細胞胚誘導率較高，而且體細胞胚的質(zhì)量較好；而7月初(授粉后8周左右)和9月中旬(授粉后大約17周)取材的合子胚體細胞胚發(fā)生率較低。因此，我們確定了水曲柳合子胚的最佳取材時期是7月中旬。 (

3、2)不同取材時期水曲柳合子胚的子葉在MS1/2基本培養(yǎng)基上同時添加不同濃度的生長素NAA和細胞分裂素BA即可誘導出體細胞胚，二者濃度適當時體細胞胚的發(fā)生多以直接發(fā)生為主，誘導的體細胞胚數(shù)量多、質(zhì)量高；當初生體細胞胚發(fā)生后，較易產(chǎn)生次生胚。最終篩選出誘導水曲柳體細胞胚發(fā)生的最佳激素組合：MS1/2+BA0.5mg·L+NAA1.5，2.5mg·L-1，誘導率達到35.32％； (3)水曲柳體細胞胚萌發(fā)培養(yǎng)基選取MS和MS1/2，并

4、附加不同濃度的NAA，結果表明體細胞胚在MS1/2培養(yǎng)基上萌發(fā)率較高，并且在子葉胚的胚根及下胚軸處可以不斷產(chǎn)生大量的次生胚；篩選出體細胞胚萌發(fā)的最佳組合是MS1/2+NAA0.01mg·L-1，萌發(fā)率可達24.8％。 (4)水曲柳的體胚苗生根難是一個亟待解決的難題。在體胚苗生根培養(yǎng)中，確定了體胚苗生根的最佳組合：MS1/2+NAA0.01mg·U1+20g·L-1蔗糖+7g·L-1瓊脂。(5)進一步驗證了水曲柳體細胞胚胎的發(fā)生有