生長抑素對瘦素誘導(dǎo)肝星狀細胞的活化增殖、PTP1B表達及JAK2-STAT3通路的影響.pdf

1、目的：通過體外實驗觀察生長抑素對蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)的調(diào)控作用,及這種作用對瘦素誘導(dǎo)肝星狀細胞的活化、增殖及JAK2-STAT3信號通路的影響,進一步闡明生長抑素抗肝纖維化的相關(guān)機制。
　　方法：
　　l.大鼠肝星狀細胞HSC-T6細胞系進行體外培養(yǎng),以重組大鼠瘦素作用于HSC-T6細胞(100 ng/ml)誘導(dǎo)活化,采用CCK-8法檢測生長抑素不同濃度(10-6、10-7、10-8、10-9、10-10、0m

2、ol/L)、不同時間(18、24、48h)對活化后HSC-T6細胞存活和生長情況的影響。
　　2.根據(jù)CCK-8的結(jié)果,設(shè)置一定濃度和作用時間,分為生長抑素組(生長抑素10-10mol/L+瘦素200ng/ml誘導(dǎo))、瘦素對照組(僅含瘦素200ng/ml)和空白對照組(僅含DMEM培養(yǎng)液),作用24h,免疫細胞化學(xué)法檢測磷酸化JAK2及STAT3蛋白表達,RT-PCR法檢測α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)和PTP1B的mRNA表達

3、情況。
　　結(jié)果：
　　l.CCK-8結(jié)果顯示:生長抑素在10-6～10-10mol/L濃度范圍內(nèi)能明顯抑制瘦素誘導(dǎo)的HSC-T6細胞體外增殖,隨著濃度加大、時間延長抑制率相應(yīng)升高,以10-6 mol/L組作用72h的作用最明顯,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　2.免疫細胞化學(xué)結(jié)果顯示:生長抑素組以10-7mol/L濃度處理瘦素誘導(dǎo)的HSC-T6細胞24h后,相對于瘦素組,細胞質(zhì)p-JAK2及細胞核內(nèi)p-STA

4、T3蛋白表達減少,JAK2和STAT3的磷酸化水平下降;瘦素對照組較正常對照組表達升高(均P<0.05)。
　　3.RT-PCR檢測結(jié)果顯示:生長抑素組以10-7mol/L濃度處理瘦素誘導(dǎo)的HSC-T6細胞
　　24h后,相對于瘦素組,α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)mRNA表達顯著降低,PTP1B的mRNA表達升高;瘦素組較正常對照組α-SMA mRNA表達顯著升高,PTP1B的mRNA表達降低(均P<0.05)。

5、　　結(jié)論：
　　l.在一定范圍內(nèi),生長抑素能夠抑制瘦素誘導(dǎo)的HSC-T6細胞生長和增殖。
　　2.在生長抑素干預(yù)下,瘦素誘導(dǎo)的HSC-T6細胞α-SMA mRNA的表達下降,細胞的活化受抑制。
　　3.生長抑素能夠下調(diào)瘦素誘導(dǎo)的HSC-T6細胞胞質(zhì)JAK2及核內(nèi)STAT3的磷酸化水平,從而抑制瘦素對JAK2-STAT3信號傳導(dǎo)的激活作用。
　　4.在生長抑素干預(yù)下,瘦素誘導(dǎo)的HSC-T6細胞PTP1B mRNA的