槲皮素對(duì)肝星狀細(xì)胞活化、增殖、凋亡及PPAR-γ表達(dá)的影響.pdf

1、目的:觀察槲皮素(Quercetin)對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞 HSC-T6增殖、凋亡和PPAR-γmRNA的表達(dá)的影響,以探討槲皮素抗肝纖維化的作用機(jī)制。
　　方法:實(shí)驗(yàn)分為5組:第一組為空白對(duì)照,即肝星狀細(xì)胞非處理組;第二組至第五組在活化的肝星狀細(xì)胞中分別加入不同劑量槲皮素,使槲皮素終濃度分別為10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L。每組加藥后繼續(xù)孵育24小時(shí)。用MTT法觀察槲皮素對(duì)肝星狀細(xì)胞增殖的影響

2、;AOEB染色觀察每組細(xì)胞凋亡情況;高效液相色譜法(HPLC)檢測細(xì)胞內(nèi)甘油三酯的含量;RT-PCR法檢測每組肝細(xì)胞α-SMA、PPAR-γmRNA水平的表達(dá),從而確定槲皮素對(duì)肝星狀細(xì)胞影響的量效關(guān)系。將40μmol/L的槲皮素與活化肝星狀細(xì)胞共同處理12、24、48小時(shí),再分別檢測各組細(xì)胞α-SMA、PPAR-γmRNA水平的表達(dá);MTT,AOEB染色,檢測各組細(xì)胞的增殖,凋亡情況;高效液相色譜法檢測細(xì)胞甘油三酯含量,作出時(shí)效關(guān)系。實(shí)

3、驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±s表示,計(jì)數(shù)資料用百分比(％)表示,兩組間比較采用χ2檢驗(yàn),用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,以P﹤0.05作為差異顯著性標(biāo)準(zhǔn)。
　　結(jié)果:經(jīng)不同濃度的槲皮素(10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L)處理肝星狀細(xì)胞24小時(shí),結(jié)果顯示:Quercetin對(duì)自活化肝星狀細(xì)胞增殖有明顯抑制作用,AOEB染色表明,凋亡細(xì)胞增多。槲皮素呈濃度依賴性的增加自活化肝星狀細(xì)胞內(nèi) TG,同時(shí)呈

4、濃度依賴性的減少α-SMAmRNA的表達(dá)、增加PPAR-γmRNAA的表達(dá)。將40μmol/L的槲皮素與自活化肝星狀細(xì)胞共同處理12、24、48小時(shí),結(jié)果顯示:細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量呈時(shí)間依賴性增加;槲皮素呈時(shí)間依賴性的減少肝星狀細(xì)胞的增殖,增加凋亡,同時(shí)呈時(shí)間依賴性的減少α-SMA的表達(dá)、增加PPAR-γmRNA的表達(dá)。
　　結(jié)論:1、槲皮素能減少肝星狀細(xì)胞的活化、增殖,增加凋亡。
　　2、槲皮素能增加細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量、可能