外傷性視神經(jīng)病變模型建立及干預(yù)修復(fù)研究.pdf

1、本文對(duì)外傷性視神經(jīng)病變模型建立及干預(yù)修復(fù)進(jìn)行了研究。本研究分為三個(gè)部分：
　　 第一部分：應(yīng)用FPI建立兔外傷性視神經(jīng)病變動(dòng)物模型。
　　 目的：應(yīng)用液壓沖擊顱腦損傷儀建立兔外傷性視神經(jīng)病變動(dòng)物模型。
　　 方法：應(yīng)用液壓沖擊顱腦損傷儀(FPI)建立兔外傷性視神經(jīng)病變模型。將兔分為正常對(duì)照組和損傷后1d、7d、14d、28d亞組，每組各8只。觀察損傷后不同時(shí)間點(diǎn)視覺(jué)誘發(fā)電位及視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)變化。
　　 結(jié)果

2、：⑴對(duì)照組視網(wǎng)膜及脈絡(luò)膜結(jié)構(gòu)良好，層次清晰，RGC呈單層排列，整齊密集，胞核清楚，核膜光滑完整;視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜各層結(jié)構(gòu)變薄，細(xì)胞數(shù)量逐漸減少，RGCs出現(xiàn)核固縮，染色加深，排列稀疏，逐漸出現(xiàn)空化RGCs。⑵正常對(duì)照組視覺(jué)誘發(fā)電位檢查均引出典型的N75-P100-N135曲線，潛伏期和振幅分別為(41.63±4.89) ms和(9.12±2.97)μv;視神經(jīng)損傷后1dP100波潛伏期延長(zhǎng)，波幅降低，與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.

3、05)，傷后潛伏期逐步延長(zhǎng)，波幅降低。
　　 結(jié)論：應(yīng)用FPI成功建立兔外傷性視神經(jīng)病變動(dòng)物模型，為外傷性視神經(jīng)病變發(fā)病機(jī)制的相關(guān)研究奠定良好基礎(chǔ)。
　　 第二部分：晶狀體損傷促進(jìn)兔外傷性視神經(jīng)病變RGCs軸突再生作用及機(jī)制。
　　 目的：探討晶狀體損傷促進(jìn)外傷性視神經(jīng)病變RGCs軸突再生的作用及機(jī)制。
　　 方法：選取128只中國(guó)白兔作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組各64只，每組按照不同觀察時(shí)

4、間點(diǎn)(1、2、4、7、10、14、21、28d)分為8個(gè)亞組。每亞組8只。應(yīng)用FPI建立右眼外傷性視神經(jīng)病變模型，實(shí)驗(yàn)組損傷右眼晶狀體，對(duì)照組不損傷右眼晶狀體。于損傷前及損傷后1、2、4、7、10、14、21、28 d行F-VEP檢查并進(jìn)行比較，并于上述各時(shí)間點(diǎn)制作視網(wǎng)膜切片，采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)視網(wǎng)膜中巨噬細(xì)胞的數(shù)量，用焦油紫染色標(biāo)記存活的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(RGCs)，對(duì)存活的RGCs進(jìn)行計(jì)數(shù)。
　　 結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組，視神經(jīng)損

5、傷后1天，F(xiàn)-VEP主波P100潛伏期延長(zhǎng)，振幅降低，10天時(shí)潛伏期最長(zhǎng)，隨后潛伏期逐漸縮短，振幅7天時(shí)最低，隨后振幅逐漸升高;在對(duì)照組，視神經(jīng)損傷后P100潛伏期逐漸延長(zhǎng)，振幅逐漸降低。在實(shí)驗(yàn)組，鐵染色標(biāo)記陽(yáng)性的活化巨噬細(xì)胞在在視神經(jīng)損傷后4天視網(wǎng)膜內(nèi)檢測(cè)到，軸突再生的RGCs損傷后7天檢測(cè);而在對(duì)照組，始終沒(méi)有檢測(cè)到鐵染色標(biāo)記陽(yáng)性的活化巨噬細(xì)胞和軸突再生的RGCs。
　　 結(jié)論：晶狀體損傷可促進(jìn)外傷性視神經(jīng)病變RGCs軸突再

6、生，活化的巨噬細(xì)胞在其中起著重要作用。
　　 第三部分：Z-DEVD-FMK對(duì)兔外傷性視神經(jīng)病變RGCs的保護(hù)作用。
　　 目的：觀察Z-DEVD-FMK對(duì)免外傷性視神經(jīng)病變視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的保護(hù)作用。
　　 方法：健康中國(guó)白兔104只，隨機(jī)選取8只兔作為空白對(duì)照組(N組），其余96只作為實(shí)驗(yàn)組，分為玻璃體腔注射組和眼周注射組，每組48只。玻璃體腔注射組中兔右眼注射Z-DEVD-FMK(A組)，左眼注射DMSO液

7、（B組）。眼周注射組中免右眼注射Z-DEVD-FMK（C組），左眼注射DMSO液（D組）。每組又根據(jù)給藥后1d、4d、7d、10d、14d、21d觀察時(shí)間點(diǎn)分為六個(gè)亞組，每個(gè)亞組8只眼。應(yīng)用液壓沖擊顱腦損傷儀(fluid percussion brain injury device，F(xiàn)PI)建立兔外傷性視神經(jīng)病變動(dòng)物模型，分別于損傷后第1d、4d、7d、10d、14d、21d行F-VEP檢查，TUNEL法檢測(cè)RGCs凋亡。
　　

8、 結(jié)果：⑴F-VEP:給藥后第7d、第10d、第14d和第21d，A組和C組的P100潛伏期逐漸縮短，振幅逐漸升高。與B組和D組相比均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。A組和C組主波潛伏期在給藥后第4d雖然仍在延長(zhǎng)，但與B組和D組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，A組傷后第21天的潛伏期和振幅分別為(64.46±5.92)ms和(6.61±2.61)μv，C組分別為(71.06±5.57)ms和(5.91±1.64)μv，兩組比較差異

9、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)?？瞻讓?duì)照組潛伏期和振幅與其他各組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。⑵TUNEL染色及RGCs凋亡率:C組和D組在傷后第1天TUNEL染色可見凋亡細(xì)胞，第4天明顯增多，至第7天達(dá)高峰。A組和C組在傷后第4天至第10天僅可見少量凋亡細(xì)胞，在第4天-第21天，與B組、D組比較，RGCs凋亡率明顯減少。
　　 結(jié)論：Caspase-3抑制劑Z-DEVD-FMK能有效地抑制視神經(jīng)損傷后神經(jīng)節(jié)