Tra2β與非小細(xì)胞肺癌的相關(guān)性研究.pdf

1、蘇州大學(xué)學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明弓l用的內(nèi)容外，本論文不含其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不含為獲得蘇州大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位證書而使用過的材料。對本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人承擔(dān)本聲明的法律責(zé)任。論文作者簽名：室竺匣竺日期：矽’≯3’4扣Tra2B與非小細(xì)胞肺癌的相關(guān)性研究中文摘要Tra2[3與

2、非小細(xì)胞肺癌的相關(guān)性研究中文摘要目的研究Tra213與非小細(xì)胞肺癌(non—smallcelllungcancer，NSCLC)臨床病理參數(shù)之間的相關(guān)性以及對NSCLC患者預(yù)后的影響，分析Tra213在NSCLC與正常肺組織中的表達(dá)差異；研究rra2p對NSCLC細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，探討Tra2p在NSCLC進(jìn)程中的作用。方法(1)回顧性調(diào)查研究83例NSCLC患者，手術(shù)切除標(biāo)本通過免疫組織化學(xué)實驗檢測NSCLC石蠟切片中Tra2[3

3、和飚一67的表達(dá)情況，分析不同臨床病理特征的病例中Tra2[3的表達(dá)差異，統(tǒng)計Tra2]3與臨床病理參數(shù)以及細(xì)胞核抗原Ki一67的表達(dá)的相關(guān)性。Kaplan—Meier分析rra2p的表達(dá)水平對于患者存活的影響。Cox多因素分析臨床病理特征以及Tra213和I(i一67表達(dá)對于患者存活的影響。(2)收集12對配對的新鮮NSCLC組織和癌旁正常組織，勻漿提取蛋白后，通過免疫印跡的方法檢測Tra213在癌組織和癌旁正常組織中的表達(dá)差異，并檢

4、測增殖細(xì)胞核抗原(ProliferatingCellNuclearAntigen，PCNA)的表達(dá)，分析兩者表達(dá)趨勢的關(guān)系。免疫印跡檢測Tra2p在NSCLC細(xì)胞(A549)和正常的支氣管上皮細(xì)胞(BEAS2B)中的表達(dá)差異。(3)將A549細(xì)胞進(jìn)行無血清培養(yǎng)72小時以后恢復(fù)血清培養(yǎng)，通過流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期的變化。再通過免疫印跡的方法檢測在饑餓釋放的過程中，Tra213的表達(dá)變化趨勢。(4)采用shRNA干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染肺癌細(xì)胞，檢測干

5、擾效率，挑選效果最好的靶點進(jìn)行后續(xù)實驗。免疫印跡檢測Tra2[3敲低后對細(xì)胞增殖的標(biāo)記物(Proliferatingcellnuclearantigen，PCNA)以及凋亡標(biāo)記物活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cysteinylaspartatespecificproteinase3，caspase3)的表達(dá)的影響。流式細(xì)胞術(shù)檢測干擾Tra2[3對細(xì)胞周期的影響。細(xì)胞計數(shù)試劑盒(CellCountingKit，CCK8)檢測Tr