產(chǎn)淀粉酶海洋酵母菌的篩選、鑒定及粗酶性質(zhì)的研究.pdf

1、本研究從自然環(huán)境中分離得到了數(shù)百株海洋酵母菌，通過使用含有曲利酚蘭的YPS平板可以產(chǎn)生透明圈的方法進一步篩選得到八株能夠產(chǎn)淀粉酶的海洋酵母菌，分別為N13d，DMC， W13a，G7b， Ba，H，M和Wla。N13d來源于采集于南極的樣品，DMC來源于采集于中國福建泉州彎近海表層海水的沉積物中， W13a和G7b來源于采集于中國南海近海表層海水的沉積物中， Ba和M來源于采集于中國煙臺長島近海海水的鲅魚腸道內(nèi)容物中，H來源于采集于中國

2、煙臺長島近海海水的鯖魚腸道內(nèi)容物中，Wla來源于采集于中國煙臺長島近海表層海水的海藻中。 在pH 3.0-pH 10.0標準實驗條件下測定了pH對于菌株所產(chǎn)粗酶活性的影響；在反應溫度范圍為20-80℃，菌株DMC， W13a，G7b， Ba，H，M和Wla所產(chǎn)粗酶的最適pH為5.0，最適溫度為50℃；菌株N13d所產(chǎn)粗酶的最適pH為4.5，最適溫度為60℃。在上述最適pH和溫度條件下，28℃搖床轉(zhuǎn)速為170 r/min，振蕩培養(yǎng)

3、48 h時，八株菌發(fā)酵液中淀粉酶的比活性分別為：菌株Ba96.0 U/mg，菌株DMC 80.9 U/mg，菌株H 256.0 U/mg，菌株M 314.5 U/mg，菌株Wla 189.0 U/mg，菌株W13a 707.0 U/mg，菌株G7b 984.0 U/mg，菌株N13d1282.0 U/mg。 酵母菌落的外觀形態(tài)、透明度、與培養(yǎng)基的結(jié)合程度、顏色和菌落邊緣；細胞出芽方式和位置、形態(tài)特征；是否形成假菌絲及假菌絲的形態(tài)

4、等，是酵母菌鑒定的重要形態(tài)指標。將八株菌的菌落顏色、大小和細胞形態(tài)等特征與參考文獻中的標準圖片按照最大相似性原則進行對比，對菌株進行初步鑒定；酵母菌生理生化特性鑒定指標有碳源發(fā)酵測試、碳源同化測試、氮源同化測試、肌醇同化測試、類淀粉化合物形成測定、在無維生素培養(yǎng)基中的生長試驗、耐高滲透壓的測試及在37℃培養(yǎng)條件下作生長溫度測試等，通過對八株菌分別進行以上指標測試對它們做進一步鑒定；提取各菌株基因組DNA，使用酵母菌18S rDNA通用引

5、物擴增目標產(chǎn)物后直接測序，將序列提交到Genbank數(shù)據(jù)庫，登陸號分別為菌株Ba EF141325，菌株DMC EF141326，菌株H EF144130，菌株M EF141323，菌株Wla EFl41322，菌株W13a EFl41324，菌株G7b DQ437077，菌株N13d DQ242509。將八株海洋酵母菌的18S rDNA序列分別與Genbank數(shù)據(jù)庫中其它酵母菌的18S rDNA序列進行比對，并進行進化樹分析，對菌株進

6、行分子生物學鑒定。結(jié)合傳統(tǒng)的形態(tài)學、生理生化特性鑒定結(jié)果與分子生物學鑒定結(jié)果，最后確定菌株Ba，H，M和Wla是解脂耶羅威亞酵母(Yarrowia lipolytica)，菌株DMC是平滑假絲酵母(Candida parapsilosis)，菌株W13a，G7b和N13d是普魯蘭短梗霉(Aureobasidium pullulans)。 本研究對這八株海洋酵母菌所產(chǎn)的淀粉酶粗酶的性質(zhì)進行了研究，證實所產(chǎn)淀粉酶可以降解生淀粉，薄層

7、層析結(jié)果表明，水解產(chǎn)物中只有葡萄糖被釋放出來，說明八株海洋酵母菌產(chǎn)生的淀粉酶為葡萄糖淀粉酶，可以作用于淀粉分子的α-1，4糖苷鍵和α-1，6糖苷鍵。 目前在陸地酵母菌中發(fā)現(xiàn)Arxula adeninivorans, Lipomyces,Saccharomycopsis， Schwanniomyces,Candida japonica,Cryptococcus sp,Corticium rolfsii和 Filobasidium