HCN4基因在風(fēng)心二狹房顫患者中表達(dá)初探.pdf

1、目的：通過分析風(fēng)濕性心臟病二尖瓣狹窄患者心房肌組織及對(duì)照組心房肌組織HCN4基因表達(dá)與心房顫動(dòng)發(fā)生的關(guān)系，為風(fēng)心二狹房顫發(fā)生機(jī)制奠定理論基礎(chǔ)，并探討風(fēng)濕性心臟病二尖瓣狹窄心房纖顫的可能調(diào)節(jié)機(jī)制。 方法：1.通過半定量逆轉(zhuǎn)錄-PCR方法(RT-PCR)考察在風(fēng)心二狹房顫患者和風(fēng)心二狹無房顫患者HCN4基因mRNA含量表達(dá)差異，以HCN4基因mRNA和內(nèi)參β-actin含量的比值作為評(píng)價(jià)HCN4基因mRNA表達(dá)水平指標(biāo)。 2

2、.通過PCR產(chǎn)物基因測序，考察實(shí)驗(yàn)中HCN4基因的同源性。 3.通過應(yīng)用SYBR Green I熒光染料，建立檢測HCN4基因mRNA的實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法(Real Time PCR)研究風(fēng)心二狹房顫患者心房肌和風(fēng)心二狹無房顫患者HCN4基因mRNA的定量表達(dá)。 結(jié)果：1.經(jīng)RT-PCR技術(shù)分析風(fēng)心二狹房顫組及對(duì)照組HCN4基因mRNA與β-actin含量的相對(duì)表達(dá)值比值(-x±s)分別為0.685±0.168和0.

3、127±0.012，兩組比較，差異有顯著性(t=20.351，P<0.01)。 2.測定HCN4基因cDNA序列同源性為100％，說明PCR擴(kuò)增產(chǎn)物正是目的基因。 3.建立的實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法在103～107拷貝數(shù)/ul的標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)為0.999。風(fēng)心二狹房顫組及對(duì)照組HCN4基因mRNA與β-actin含量的相對(duì)表達(dá)值比值(-x±s)分別為1.323±1.226和0.116±0.192(r=5.8