房顫相關(guān)HCN4基因新突變的識別及功能研究.pdf

1、背景：心房顫動，簡稱房顫，是臨床上最為常見的心律失常，具有較高的致殘率與致死率。研究發(fā)現(xiàn)部分房顫有其遺傳學(xué)基礎(chǔ)。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，編碼心臟超極化激活鉀離子通道（If通道）的基因HCN4突變可導(dǎo)致竇房結(jié)功能障礙，其中一部分突變攜帶者伴發(fā)房顫，提示房顫與HCN4基因變異有關(guān)。
　　目的：識別房顫相關(guān)HCN4基因新突變，揭示其導(dǎo)致房顫的細胞電生理學(xué)機制。
　　方法：收集120例無血緣關(guān)系的特發(fā)性房顫患者和200名健康對照者的臨床資

2、料和血標(biāo)本，抽提基因組DNA。通過PCR反應(yīng)擴增候選基因HCN4的全部編碼區(qū)和剪接位點序列，通過PCR-測序和序列比對發(fā)現(xiàn)HCN4基因變異。通過測序分析 HCN4基因變異在特發(fā)性房顫患者和健康對照者中的頻率分布和多物種HCN4蛋白序列比對分析突變氨基酸在物種進化上的保守性，以識別出新的特發(fā)性房顫相關(guān)HCN4基因突變。應(yīng)用分子克隆技術(shù)克隆野生型 HCN4基因，通過定位誘變獲得突變型HCN4基因。利用基因重組技術(shù)構(gòu)建野生型和突變型HCN4基

3、因的真核表達載體，利用脂質(zhì)體將重組載體分別轉(zhuǎn)染 COS-7細胞，應(yīng)用膜片鉗在細胞水平研究 HCN4基因突變對心臟 If通道電生理特性的影響，以揭示HCN4基因突變導(dǎo)致房顫的細胞電生理機制。
　　結(jié)果：在l例特發(fā)性房顫伴竇性心動過緩患者的HCN4基因發(fā)現(xiàn)了新的錯義突變，其所編碼的If通道蛋白HCN4的第600位的天冬氨酸變?yōu)楣劝彼幔╬.D600E）。在200例健康對照者均未發(fā)現(xiàn)任何HCN4基因突變。多物種HCN4基因編碼氨基酸序列比