食管癌相關(guān)新基因ECRG-2、ECRG-4的克隆及功能研究.pdf

1、食管癌是世界上最常見的癌癥之一,約有一半以上的病例發(fā)生在中國.該室用差異顯示PCR(DD-PCR)法從正常食管上皮和食管癌及組織中分離了4個條差異EST片段,分別命名為食管癌相關(guān)基因1~4(EsopagealCancerRelatedGene,ECRG-1~4).該課題著重于ECRG-2、ECRG-4的克隆、鑒定以及編碼蛋白生物學特性的初步設(shè)計.一、ECRG-2基因的研究.1、ECRG-2基因cDNA全長和基因組結(jié)構(gòu)確定;2、ECRG-

2、2組織表達分析;3、生物信息學方法預測ECRG-2基因編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能;4、ECRG-2編碼蛋白亞細胞定位;GFP熒光檢測到ECRG-2蛋白定位于細胞外膜上,與預測結(jié)果相符合.5、ECRG-2編碼蛋白的原核表達;將ECRG-2基因克隆入pGEX-4T-1原核表達載體中,研究人員獲得了ECRG-2-GST融合蛋白的高效表達,為抗體制備奠定了堅實的基礎(chǔ).6、ECRG-2基因突變篩選.在94列正常人血液樣本、40例正常食管標本、18例配

3、對的食管癌及癌旁組織中對ECRG-2外顯子進行突變檢測,發(fā)現(xiàn)在其第四外顯子內(nèi)存在(TCA)<,3>和(TCA)<,4>兩種基因型多態(tài).二、ECRG-4基因研究.1、ECRG-4基因克隆;以因特網(wǎng)為平臺,人類基因組計劃數(shù)據(jù)庫為試驗材料,各種軟件為工具組成網(wǎng)上實驗室,從食管癌相關(guān)基因ECRG-4的97bpEST的基礎(chǔ)上成功克隆并鑒定了該基因.2、組織分布;ECRG-4在正常食管、膀胱組織中表達明顯高于相應的癌組織.3、ECRG-4編碼蛋白生