大鼠心肌梗死后梗死周邊區(qū)HCN2、HCN4、KCNE1及KCNE2表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化.pdf

1、目的：急性心肌梗死后梗死周邊缺血區(qū)尚存活的心肌，往往在梗死后室性心律失常的發(fā)生上起關(guān)鍵作用。心肌細(xì)胞膜離子通道的異?；顒?dòng)形成電重構(gòu)，可能是導(dǎo)致心律失常的重要機(jī)制。研究表明超極化激活環(huán)核苷酸門控（HCN）陽(yáng)離子通道亞單位為編碼心臟起搏電流（If）的基因，包括HCN1～4共4個(gè)異構(gòu)型，HCN主要存在于竇房結(jié)（SAN）起博細(xì)胞中，有少量存在心肌工作細(xì)胞中。成年大鼠心室肌細(xì)胞中，HCN2是最主要的異構(gòu)型，有極少量HCN4表達(dá)。生理情況下HCN通

2、道在起搏細(xì)胞舒張期自動(dòng)除極中發(fā)揮重要作用，參與心臟的起搏活動(dòng)。有研究發(fā)現(xiàn)病理情況下HCN2和HCN4通道表達(dá)及激活異常，這可能引起心肌細(xì)胞自律性增高而誘發(fā)心律失常。KCNE基因家族編碼一類只含一個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)的離子通道蛋白，作為輔助性β-亞基，與組成離子通道的α-亞基相互作用，形成穩(wěn)定的離子通道復(fù)合體，發(fā)揮不同的生理效應(yīng)。KCNE1、KCNE2主要分布在心肌，參與對(duì)門控鉀離子通道的調(diào)節(jié)，影響心肌細(xì)胞動(dòng)作電位的Ⅱ、Ⅲ相復(fù)極。因此，其表達(dá)的異常

3、將影響相應(yīng)離子通道的生理特性。本研究通過(guò)檢測(cè)急性心肌梗死后梗死周邊區(qū)心肌組織中HCN2、HCN4通道蛋白及KCNE1、KCNE2亞單位的mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)，了解其表達(dá)是否發(fā)生變化，及其動(dòng)態(tài)變化的規(guī)律，為探討心肌梗后室性心律發(fā)生的離子機(jī)制提供更多的理論基礎(chǔ)。 方法：結(jié)扎Sprague-Dawley大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支建立心肌梗死模型。術(shù)后成功建模的20只大鼠隨機(jī)分為4組：AMI后24h組、1周組、2周組、4周組，每組5只。假手術(shù)

4、組大鼠共20只，為左冠狀動(dòng)脈前降支只穿線不打結(jié)，術(shù)后隨機(jī)分成前述4個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)5只。于各時(shí)間點(diǎn)取大鼠左心室梗死周邊區(qū)心肌組織（假手術(shù)組大鼠取左室相應(yīng)部位的心肌組織），分別用RT-PCR及Western Blot檢測(cè)HCN2、HCN4、KCNE1及KCNE2 mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)，免疫組化法定性檢測(cè)HCN2、HCN4蛋白質(zhì)的表達(dá)。 結(jié)果：假手術(shù)組大鼠左室心肌中有HCN2、HCN4、KCNE1及KCNE2的表達(dá)。心肌梗死后

5、各時(shí)間點(diǎn)梗死周邊區(qū)心肌組織中HCN2、HCN4、KCNE1及KCNE2的mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)均呈動(dòng)態(tài)變化的過(guò)程：（1）、HCN2、HCN4的表達(dá)變化：心肌梗死后24h，二者的表達(dá)出現(xiàn)緩慢的上升趨勢(shì)，在1周時(shí)表達(dá)達(dá)到峰值，之后逐漸下降，但在梗死后4周時(shí)，HCN2的mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)水平仍高于假手術(shù)組，而HCN4的表達(dá)已回落至假手術(shù)組水平；（2）、KCNE1、KCNE2的表達(dá)變化：心肌梗死后24h，KCNE1的表達(dá)顯著增高，之后，表達(dá)

6、繼續(xù)增高，在2周時(shí)達(dá)到峰值，4周時(shí)表達(dá)下降，mRNA的表達(dá)回落至假手術(shù)組水平，但蛋白質(zhì)的表達(dá)仍高于24小時(shí)組；KCNE2的表達(dá)在心肌梗死后24h時(shí)也顯著增高，1周時(shí)達(dá)到峰值，之后緩慢下降，但在4周時(shí)其mRNA的表達(dá)仍高于假手術(shù)組，而蛋白質(zhì)的表達(dá)已回落至假手術(shù)組水平。 結(jié)論：正常大鼠左室心肌中存在HCN2、HCN4、KCNE1及KCNE2的表達(dá)；急性心肌梗死后左室梗死周邊區(qū)心肌組織中HCN2、HCN4、KCNE1及KCNE2的mR