醛固酮拮抗劑對心肌梗死后大鼠心肌TGF-β1和CTGF表達的影響.pdf

1、目的：目前的研究已經(jīng)證實醛固酮受體拮抗劑螺內(nèi)酯在用于心肌梗死(myocardial infraction,MI)后治療時起到了逆轉(zhuǎn)心室重構(gòu)的作用。國內(nèi)外實驗也已經(jīng)證實轉(zhuǎn)化生長因子-betal(transforming growth factor-betal，TGF-β1)和結(jié)締組織生長因子(Connective tissue growth factor，CTGF)分別參與了心肌梗死后心室重構(gòu)這一重要病理過程。 但在螺內(nèi)酯用于心肌

2、梗死后逆轉(zhuǎn)心室重構(gòu)這一過程中，螺內(nèi)酯是否影響了非梗死區(qū)心肌TGF-β1和CTGF的表達目前并不十分清楚。本試驗擬采用結(jié)扎冠狀動脈前降支造成心肌梗死大鼠動物模型，用螺內(nèi)酯進行干預(yù)，觀察其對AMI后非梗死區(qū)心肌TGF-β1和CTGF表達的影響，以進一步研究螺內(nèi)酯對逆轉(zhuǎn)心肌梗死后心室重構(gòu)的作用機制。 方法：健康雄性Sprague Dawley大鼠90只，清潔級，12-15周齡，體重200-300g。結(jié)扎大鼠左冠狀動脈前降支建立大鼠急性

3、心肌梗死模型，隨機分為3組，假手術(shù)組(Sham組，n=20)、心肌梗死對照組(AMI組，n=20)和螺內(nèi)酯治療組(Spi組，螺內(nèi)酯40mg/kg/d，n=20)。應(yīng)用免疫組化方法測定非梗死區(qū)心肌組織TGF-β1、CTGF蛋白表達，應(yīng)用多聚酶鏈瓦反應(yīng)(reverse-transcrmtase polymerase chain reaction，RT-PCR)方法測定非梗死區(qū)心肌組織TGF-β1 mRNA、CTGFmRNA。組間比較采用單因

4、素方差分析，兩兩比較采用q檢驗。數(shù)據(jù)采用SPSS 14.0統(tǒng)計軟件處理。 結(jié)果： 1.心肌組織非梗死區(qū)HE染色形態(tài)學(xué)變化觀察結(jié)果Sham組14天中無心肌壞死發(fā)生，心肌纖維排列整齊，早期可見有少量炎癥細胞侵潤；與Sham組比較，AMI組在7天、11天、14天可見心肌纖維正常結(jié)構(gòu)被明顯破壞，心肌纖維腫脹、溶解斷裂、壞死甚至融合成大片狀，心肌細胞間結(jié)締組織大量增多，并可見炎癥細胞浸潤和心肌纖維化等，病變區(qū)可見嗜伊紅染色增強，與

5、AMI組比較，Spi組在7天、11天、14天時上述形態(tài)學(xué)改變均明顯減輕，14天時改變最明顯(圖1-3)。 2.螺內(nèi)酯對非梗死區(qū)心肌組織TGF-β1、CTGF蛋白表達的影響2.1螺內(nèi)酯對非梗死區(qū)心肌組織TGF-β1蛋白表達的影響在Sham組大鼠TGF-β1在非梗死區(qū)心肌細胞的胞漿及間質(zhì)內(nèi)表達，心肌胞漿可見較少量淡黃色顆粒物質(zhì)，TGF-β1表達呈弱陽性，早期可見少量炎癥細胞；AMI組大鼠心肌細胞胞漿及間質(zhì)內(nèi)布滿棕黃色顆粒狀物質(zhì)，甚至

6、胞核也有表達，TGF-β1表達呈強陽性且明顯增強，在后期炎性細胞與纖維化明顯增多。與Sham組比較，48小時、7天、11天及14天時AMI組和Spi組大鼠非梗死區(qū)心肌組織TGF-β1的表達明顯增多，峰值出現(xiàn)在7天時(P均<0.01)：與AMI組比較，Spi組非梗死區(qū)心肌組織TGF-β1表達在48h時無差別(P>0.05)，在7天、11天及14天時明顯降低(P<0.01)。 2.2螺內(nèi)酯對非梗死區(qū)心肌組織CTGF蛋白表達的影響CT

7、GF在心肌中陽性顆粒表達的分布面積較TGF-β1要少，主要在間質(zhì)細胞及血管平滑肌細胞表達。在Sham組大鼠間質(zhì)及冠狀血管平滑肌僅有少量表達，而在AMI組大鼠心肌間質(zhì)和血管平滑肌可見大量的棕黃色物質(zhì)表達，胞核也有表達。也可見炎性細胞和纖維化。與Sham組比較，48h、7天、11天及14天時AMI組和Spi組非梗死區(qū)心肌組織CTGF的表達明顯增多，最高峰值出現(xiàn)在7天時(P均<0.01)；與AMI組比較，Spi組非梗死區(qū)心肌組織CTGF表達在

8、48h時無差別(P>0.05)，但在7天、11天及14天時均明顯降低(P<0.01)。 3.螺內(nèi)酯對非梗死區(qū)心肌組織TGF-β1mRNA、CTGFmRNA表達的影響3.1螺內(nèi)酯對非梗死區(qū)心肌組織TGF-β1mRNA表達的影響與Sham組相比較，ANI組和Spi組大鼠非梗死區(qū)心肌組織TGF-β1mRNA表達在48小時、7天、11天及14天時均顯著增高，最高峰值出現(xiàn)在7天時(P均<0.01)；與AMI組相比較，Spi組大鼠心肌TGF-β1m

9、RNA表達在48小時無差別(P>0.05)，在7天、11天及14天時均顯著降低(P<0.01)。 3.2螺內(nèi)酯對非梗死區(qū)心肌組織CTGFmRNA表達的影響與Sham組相比較，AMI組和Spi組大鼠非梗死區(qū)心肌CTGFmRNA表達在48h、7天、11天及14天時均顯著增高，最高峰值出現(xiàn)在7天時(P均<0.01)；與AMI組相比較，Spi組大鼠心肌CTGFmRNA表達在48h時無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，在7天、11天及14天時均

10、顯著降低(P均<0.01)。 結(jié)論： 1.心肌梗死后大鼠非梗死區(qū)心肌細胞因子TGF-β1、CTGF在48小時、7天、11天、14天時表達均明顯增強，且峰值出現(xiàn)在7天時，隨后逐漸下降，但仍較假手術(shù)組表達高。 2.螺內(nèi)酯用于心肌梗死后大鼠，與心肌梗死對照組比較，螺內(nèi)酯治療組大鼠非梗死區(qū)心肌TGF-β1、CTGF表達明顯降低。螺內(nèi)酯用于心肌梗死后大鼠有逆轉(zhuǎn)心室重構(gòu)的作用，且TGF-β1、CTGF被證實參與心室重構(gòu)的過程，因此本