坎地沙坦對慢性心衰大鼠心肌纖維化及心肌TGF-β-,1-、CTGF表達的影響.pdf

1、背景與目的 慢性心力衰竭(Chronic heart failure,CHF)是當前危害人類健康的主要疾患之一，目前研究認為心室重塑(Myocardial remodeling)是心衰的基本發(fā)生機制，心肌細胞和細胞外基質(zhì)的變化是心室重塑的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，前者包括心肌細胞喪失及心肌細胞肥大；后者主要包括膠原沉積和間質(zhì)纖維化即心肌纖維化(Myocardialfibrosis,MF)。MF是不同病因心臟病變發(fā)展到一定階段的共同病理改變，以心

2、肌間質(zhì)膠原纖維濃度顯著升高或膠原容積分數(shù)(Collagen volume fraction，CVF)顯著增高為特征。MF與許多臨床事件發(fā)生直接相關(guān)，可導(dǎo)致心力衰竭、心律失常、心臟擴大、猝死等。晚近研究發(fā)現(xiàn)，某些細胞因子在MF的形成中發(fā)揮了關(guān)鍵作用。轉(zhuǎn)化生長因子B1(Transforming growth factor β1,TGF-β1)即是與MF有關(guān)的最重要的細胞因子，結(jié)締組織生長因子(Connective tissue growth

3、 factor,CTGF)是近年來發(fā)現(xiàn)的與器官纖維化有密切關(guān)系的細胞因子，可作為TGF-β<,1>下游的信號蛋白介導(dǎo)TGF-β<,1>的促纖維化作用，是引起MF的重要細胞因子之一。血管緊張素Ⅱ、醛固酮、轉(zhuǎn)化生長因子β<,1>、內(nèi)皮素等均可通過上調(diào)CTGF表達，進而促進MF的形成。CTGF現(xiàn)被認為是抗MF治療的新靶點。血管緊張素Ⅱ受體阻滯劑可改善心肌重塑，其作用已得到公認。但其具體作用機制仍未完全明了。本課題旨在觀察CTGF、TGF-β<

4、,1>在慢性心力衰竭大鼠心肌中的表達，以探討其在MF中的確切作用，并觀察坎地沙坦對MF及纖維化心肌中CTGF、TGF-β<,1>表達的影響，以進一步了解MF在慢性心衰進展中的作用。 材料與方法 雄性Wistar大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后采用腎上腹主動脈縮窄法制作慢性心衰模型，另取sham組只分離腹主動脈不結(jié)扎縫線作為對照。術(shù)后8周從心衰模型組有心衰表現(xiàn)的大鼠中抽取10只癥狀較輕大鼠檢測血流動力學(xué)參數(shù)，證明達到心衰后(LVEDP

5、≥15mmHg)，將剩余大鼠隨機分為兩組，心衰組(HF組)及藥物組(Drug組)。Drug組用坎地沙坦2mg/kg/d灌胃，sham組、HF組用生理鹽水灌胃。繼續(xù)喂養(yǎng)4周。4周后所有大鼠用多導(dǎo)電生理儀檢測血流動力學(xué)參數(shù)，用Masson染色法觀察左室心肌膠原形態(tài)，圖像分析測量膠原容積分數(shù)(CVF)和血管周圍膠原面積(PVCA)，免疫組化法檢測心室肌中TGF-β<,1>、CTGF表達。 結(jié)果： 1.模型制作8周后sham組

6、大鼠一般狀態(tài)正常，其余兩組大鼠出現(xiàn)明顯心衰表現(xiàn)；行藥物干預(yù)4周后，HF組與Dmg組比較，前者心衰惡化，后者心衰表現(xiàn)明顯減輕。 2.模型制作12周后三組大鼠收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)及平均動脈壓(MAP)分別為(mmHg)：sham組：134.38±8.68，95.38±9.24，108.38±8.96；HF組：119.00±10.30，82.00±8.19，94.33±8.80；Drug組：115.50±10.49，75

7、.38±9.40，87.42±8.30。HF組大鼠SBP、DBP、MAP均較sham組為低，而后者也比Drug組高。HF組與sham組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，而與Drug組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，提示HF組大鼠血壓水平較sham組為低，而HF組與Dmg組相比血壓水平變化無統(tǒng)計學(xué)意義。 3.模型制作12周后三組大鼠LVEDP(mmHg)、+dp/dtmax(mmHg/s)、-dp/dtmax(mmHg/s)

8、分別為：sham組：4.63±3.58，5553.50±542.55，3675.50±410.00；HF組：21.63±5.71，4172.13±716.55，2831.38±501.50；Drug組：10.00±3.07，5151.88±376.70，3486.50±349.10。sham組大鼠LVEDP較HF組為低，而后者又比Drug~高。三組間比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。+dp/dtmax、-dp/dtmax HF組大鼠較s

9、ham組為低(P<0.01)，而Drag組又比前者高(P<0.01)，與sham組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P<.05)，說明了HF組大鼠達到了心衰標準，Drug組心功能明顯改善。 4. 模型制作12周后LVMI﹪、CVF﹪、PVCA﹪在HF組大鼠分別為：1.87±0.05，3.54±0.66，0.59±0.16；HF組為：3.01±0.12，7.29±1.00，2.03±0.23，Drug組為：2.16±0.11，4.31±0.

10、78，0.89±0.13。HF組大鼠各指標明顯高于sham組(P<0.01)；而與HF組比較，Dmg組顯著降低(P<0.01)。說明HF組大鼠心肌間質(zhì)中纖維組織沉積較多，而Dmg組心肌纖維化程度較輕。 5.免疫組織化學(xué)檢測表明，CTGF在心肌血管平滑肌中和心肌間質(zhì)中皆有表達，TGF-β<,1>主要在心肌間質(zhì)中表達。CTGF、TGF-β<,1>在三組大鼠心肌中表達值分別為(平均灰度值)：sham組：106.25±12.45，93

11、.38±9.00；HF組：131.71±10.78，161.00±13.63：Drug組：117.33±11.61，116.88±12.24。CTGF在sham組大鼠心肌中血管平滑肌周圍呈弱陽性表達，在HF組呈強陽性表達，在其心肌間質(zhì)亦有表達，而Drug組大鼠心肌中其表達減弱，HF組與sham組比較(P<0.01)，Drug組與HF組比較(P<0.01)，sham組與Drug組比較： (P<0.01)。TGF-β<,1>主要在大鼠心肌間

12、質(zhì)中表達，HF組、shaIn組及Dmg組大鼠任兩組相比差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。這些數(shù)據(jù)說明經(jīng)4周坎地沙坦治療可降低但不能完全阻斷CTGF、TGF-β<,1>表達。 結(jié)論 1.心肌纖維化可能是壓力超負荷慢性心力衰竭的重要發(fā)病機制； 2．CTGF、TGF-β<,1>參與了壓力超負荷心衰大鼠心肌纖維化的發(fā)??； 3.坎地沙坦逆轉(zhuǎn)心室重塑可能與其降低CTGF、TGF-β<,1>表達有關(guān)； 4.選