MMP—9、TIMP—1在心衰幼鼠心肌中的表達(dá)及坎地沙坦的干預(yù)作用.pdf

1、小兒慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)是不同病因心臟病發(fā)生、發(fā)展的共同結(jié)局.目前認(rèn)為CHF的發(fā)生機(jī)制是心室重塑.新近研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)合成與降解的失衡與心室重塑發(fā)生密切相關(guān).而細(xì)胞外基質(zhì)合成與降解的平衡又取決于基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases MMPs)及其組織抑制因子(tissue inhibitor of mctalloproteinases FIMPs)的

2、平衡.坎地沙坦作為一種國(guó)內(nèi)新上市的血管緊張素受體阻滯劑(Angiotensin receptor blockers,ARB),已應(yīng)用于心衰的臨床治療,取得了較好的療效.但是,坎地沙坦治療心衰的具體作用機(jī)制尚未完全闡明,其作用是否涉及到MMPs、TIMPs,目前研究較少.本課題擬制作腹主動(dòng)脈縮窄幼鼠心衰模型,旨在觀察MMP-9、TIMP-1在心衰幼鼠心肌中的表達(dá),以探明其在心室重塑中的確切作用,并用坎地沙坦干預(yù),觀察其對(duì)心室重塑及重塑心肌

3、中MMP-9、TIMP-1表達(dá)的影響,以發(fā)現(xiàn)坎地沙坦治療心衰新的作用機(jī)制.材料與方法雄性Wistar幼鼠采用腎上腹主動(dòng)脈縮窄法制作慢性心衰模型,術(shù)后5周隨機(jī)抽取10只幼鼠檢測(cè)血流動(dòng)力學(xué)參數(shù),證明達(dá)到心衰后(LVEDP≥15mmHg)<'[2]>,將剩余幼鼠隨機(jī)分為兩組,心衰組(model組)及藥物組(candesartan組);另取對(duì)照組(sham組)只分離腹主動(dòng)脈不結(jié)扎縫線作為對(duì)照.藥物組用坎地沙坦0.1mg/kg/d灌胃,對(duì)照組、心

4、衰組用生理鹽水灌胃,繼續(xù)喂養(yǎng)4周.9周后再次檢測(cè)血流動(dòng)力學(xué)參數(shù),用Masson染色法觀察左室心肌膠原形態(tài),圖像分析測(cè)量膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF)和血管周圍膠原面積(PVCA),免疫組化法檢測(cè)心室肌中MMP-9、TIMP-1表達(dá). 結(jié)果 1. 模型制作5周后對(duì)照組幼鼠一般狀態(tài)正常,其余兩組幼鼠出現(xiàn)明顯心衰表現(xiàn):行藥物干預(yù)4周后,心衰組與藥物組比較,后者心衰表現(xiàn)明顯減輕,前者更加嚴(yán)重. 2.模型制作9周后各組幼鼠LVED

5、P(mmHg)、+dp/dtmax(mmHg/s)、-dp/dtmax(mmHg/s)分別為:①對(duì)照組:5.57±1.10,5632.68±667.06,4149.80±693.40;②心衰組:21.70±4.52,3965.07±637.53,2957.47±560.64;③藥物組:8.60±1.64,5043.09±581.33,3848.97±524.25.對(duì)照組幼鼠LVEDP較心衰組為低(p<0.01),而后者又比藥物組高(p<

6、0.01).說明了心衰模型制作成功,用藥物干預(yù)后心衰較前明顯好轉(zhuǎn).+dp/dtmax、-dp/dtmax心衰組幼鼠較對(duì)照組為低(p<0.01),而藥物組又比前者升高(p<0.05),說明了經(jīng)坎地沙坦治療后幼鼠心功能得到改善. 3.模型制作9周后各組幼鼠的血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo),收縮壓(mmHg)、舒張壓(mmHg)及平均動(dòng)脈壓(mmHg)各組幼鼠分別為:①對(duì)照組:121.25±9.65,81.00±6.93,94.54±7.59;②心衰

7、組:104.50±6.44,71.13±6.92,82.96±6.64;③藥物組:96.89±7.94,65.89±7.51,76.11±7.86.對(duì)照組幼鼠收縮壓、舒張壓及平均動(dòng)脈壓均較心衰組為高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),心衰組比藥物組稍高,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05).說明了心衰后幼鼠血壓較正常組低,而經(jīng)坎地沙坦治療后,血壓有輕微下降. 4.模型制作9周后LVMI、CVF、PVCA在sham組幼鼠分別為:①對(duì)

8、照組:1.58±0.32,3.31±0.38,0.36±0.16;②心衰組為:2.60±0.45,5.97±0.83,1.33±0.40;③藥物組為:2.13±0.41,4.05±0.68,0.88±0.28.心衰組幼鼠各指標(biāo)明顯高于對(duì)照組(P<0.01);而與心衰組比較,藥物組顯著降低(P<0.05).說明心衰組幼鼠心衰形成后心肌間質(zhì)中纖維膠原沉積較多,心室重塑明顯,而經(jīng)藥物作用后,明顯改善心室重塑. 5.免疫組織化學(xué)檢測(cè)表明

9、,MMP-9、TIMP-1主要在心肌細(xì)胞胞漿內(nèi)表達(dá).MMP-9、TIMP-1、MMP-9/TIMP-1比值在各組幼鼠心肌中分別為:①對(duì)照組:45.47±11.15,36.30±5.81,1.28±0.37;②心衰組:66.49±8.89,26.84±5.42,2.56±0.58;③藥物組:53.12±10.71,34.50±7.40,1.63±0.55.MMP-9在sham組幼鼠心肌細(xì)胞表達(dá)較弱,在心衰組強(qiáng)陽性表達(dá),而藥物組幼鼠心肌中其

10、表達(dá)較弱,兩組相比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05).TIMP-1在心衰組幼鼠心肌細(xì)胞表達(dá)較對(duì)照組、藥物組明顯減弱,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05).MMP-9/TIMP-1比值在心衰組幼鼠明顯高于對(duì)照組、藥物組,差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01).說明MMP-9/TIMP-1系統(tǒng)相互作用的失衡與心室重塑有關(guān),經(jīng)4周坎地沙坦治療,可能通過恢復(fù)MMP-9/TIMP-1的比例平衡,改善心室重塑和心功能. 結(jié)論 1.MMP-9/T