PAI-1與老齡大鼠心肌纖維化相關(guān)性及氯沙坦干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:心肌纖維化是心臟老化的一個重要特征。衰老過程中發(fā)生的心肌纖維化可能與腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)及各種纖維化相關(guān)多肽水平的變化有關(guān)。RAS的效應(yīng)分子之一血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)可通過多個環(huán)節(jié)影響著心肌纖維化的形成，其中很重要的一個機(jī)制就是它可以通過AT1受體刺激心臟成纖維細(xì)胞合成和分泌纖溶酶原激活物抑制劑-1(PAI-1)，從而抑制膠原等細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的降解，使膠原沉積增多。目前有研究證實(shí)：在衰老的大鼠心肌局部AngⅡ和P

2、AI-1表達(dá)是增高的。而PAI-1在高血壓所致的腎小球硬化、肺纖維化及肝硬化等疾病中的致纖維化作用己得到證實(shí)，但在老齡心肌纖維化中的作用還不很清楚。氯沙坦為AngⅡ-AT1受體拮抗劑，研究表明，氯沙坦能夠抑制自發(fā)性高血壓大鼠心肌纖維化的發(fā)展，但其是否能夠抑制增齡所致心肌纖維化的研究國內(nèi)外報(bào)道較少。本實(shí)驗(yàn)通過研究不同月齡大鼠心臟形態(tài)結(jié)構(gòu)和PAI-1表達(dá)的變化，以及氯沙坦對老齡大鼠心肌纖維化的影響，探討老齡大鼠心肌纖維化的發(fā)生機(jī)制，為預(yù)防和

3、延緩增齡所致心肌纖維化及指導(dǎo)臨床用藥提供一定的理論根據(jù)。 方法:選取正常的Wistar大鼠30只，隨機(jī)分成三組：青年鼠(3月齡)10只，老年鼠(20月齡)20只，隨機(jī)分為老年對照組10只，老年氯沙坦組10只。氯沙坦(20mg/kg/d)溶于2-3m1蒸餾水中灌胃，用藥10周。青年組和老年對照組給予相應(yīng)劑量的蒸餾水灌胃10周。正常飼料喂養(yǎng)，飲水與活動均不限。10周末將大鼠腹腔麻醉后，分離左心室(含室間隔)并稱其重量(LVW)，除以

4、體重(BW)得左室重量指數(shù)(LNMI)。將左心室心肌組織分為兩部分：(1)取左心室中上段橫切面組織一塊制成石蠟包埋切片：①VG染色，顯微鏡下觀察并攝片，使用圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行半定量研究，通過灰度調(diào)節(jié)來區(qū)分膠原與非膠原成分，測量心肌膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF)、心肌血管周圍膠原面積與管腔面積比例(PVCA)。計(jì)算方法：CVF=膠原面積/總面積，其中膠原面積不包括血管周圍膠原面積。PVCA=壁內(nèi)小動脈管腔周圍膠原面積/動脈管腔面積。②PAI-1免疫

5、組化染色半定量研究：SP法，切片在顯微鏡下觀察并顯微照相，應(yīng)用計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行半定量分析，計(jì)算其陽性面積比。(2)羥脯氨酸濃度(HC)測量：制備心肌組織勻漿，堿水解法，取上清，應(yīng)用分光光度計(jì)，550nm處測各管吸光度。羥脯氨酸濃度=[(測定管吸光度-空白管吸光度)÷(標(biāo)準(zhǔn)管吸光度-空白管吸光度)]×標(biāo)準(zhǔn)管含量(5μg/ml)×[水解液總體積(10ml)÷組織濕重(mg)]。對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，分別比較青年組與老年對照組、老年氯沙

6、坦組和老年對照組之間CVF、PVCA、HC及PAI-1的變化，同時進(jìn)行CVF、PVCA、HC與PAI-1的相關(guān)性分析。 結(jié)果: 1．各組大鼠左室重量指數(shù)(LVMI)的比較：與青年組相比，老年對照組LVMI降低，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。老年氯沙坦組LVMI較老年對照組有降低的趨勢。 2．各組大鼠心肌HC，CVF和PVCA的比較：與青年組相比，老年對照組HC、CVF和PVCA均增高，有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均

7、為P<0.01)；與老年對照組相比，老年氯沙坦組HC、CVF和PVCA明顯降低，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01，P<0.01，P<0.05)。 3．各組大鼠心肌PAI-1免疫組化染色及半定量分析：PAI-1表達(dá)在老年對照組較青年組明顯增強(qiáng)(P<0.05)；與老年對照組相比，老年氯沙坦組PAI-1表達(dá)減少(P<0.05)。 4．PAI-1與HC，CVF和PVCA直線相關(guān)分析：PAI-1表達(dá)與HC，CVF和PVCA呈正相

8、關(guān)(r<,s>分別為0.693、0.738、0.672；P<0.01，P<0.01，P<0.01)。 結(jié)論: 1．老年對照組HC、CVF和PVCA明顯高于青年組，提示：隨著增齡，老齡大鼠心肌膠原含量增加，異常聚積在心肌間質(zhì)和血管周圍，形成心肌纖維化。 2．PAI-1表達(dá)在老年對照組較青年組明顯增加，而且PAI-1與HC、CVF和PVCA呈明顯的正相關(guān)，提示：PAI-1可能參與了增齡過程中老齡大鼠心肌纖維化的形成。