家兔慢性心肌冬眠后心室重塑與氯沙坦干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:在建立家兔慢性心肌冬眠模型的基礎(chǔ)上，觀察慢性冬眠過(guò)程中心肌細(xì)胞及心肌間質(zhì)膠原纖維的變化并探討其可能機(jī)制，觀察這些變化對(duì)心功能的影響及氯沙坦的干預(yù)結(jié)果。 方法:51只清潔級(jí)健康家兔隨機(jī)分為模型組(n=39)和假手術(shù)組(n=12)，采用開(kāi)胸不全結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支(LAD)中段的方法，造成心肌慢性缺血，構(gòu)建家兔慢性冬眠心肌模型；假手術(shù)組僅開(kāi)胸不作LAD結(jié)扎。術(shù)中模型組死亡3只，假手術(shù)組全部存活。將模型組存活的36只家兔隨機(jī)分為

2、3組，慢性冬眠心肌組(CHM組，n=12)，小劑量氯沙坦干預(yù)組(LT1組，10mg.kg<'-1>．d<'-1>，n=12)、大劑量氯沙坦干預(yù)組(LT2組，30mg.kg<'-1>．d<'-1>，n=12)。存活的假手術(shù)組(SO組，n=12)作為對(duì)照組。術(shù)后1個(gè)月分別采用下列方法檢測(cè)模型制作是否成功：冠脈造影觀察LAD中段狹窄程度，超聲心動(dòng)圖、多巴酚丁胺負(fù)荷超聲心動(dòng)圖試驗(yàn)(DSE)觀察左室整體功能及慢性缺血心肌節(jié)段室壁運(yùn)動(dòng)，肉眼觀察心肌

3、大體形態(tài)學(xué)改變，HE染色觀察心肌組織形態(tài)學(xué)改變，7天肌鈣蛋白I檢測(cè)心肌梗死。 在鑒定模型成功的基礎(chǔ)上，以苦味酸天狼星紅染色(PSR)染色檢測(cè)心肌細(xì)胞間質(zhì)膠原纖維容積百分?jǐn)?shù)(ICVF)，PSR偏振光顯微鏡下觀察間質(zhì)膠原纖維類型和比例改變、并計(jì)算Ⅰ/Ⅲ膠原纖維異常比例積分(P<,Ⅰ/Ⅲ>)，免疫組化法及Western blot測(cè)定基質(zhì)金屬蛋白酶-2、9(MMP-2、MMP-9)及其抑制劑(TIMP-2)的表達(dá)情況，TIJNEL法檢測(cè)

4、心肌細(xì)胞凋亡率(Rapo)，二維超聲心動(dòng)圖觀察左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)及短軸縮短率(LVFS)。 結(jié)果: 1、慢性心肌冬眠模型的鑒定CHM組12只家兔完成了所有實(shí)驗(yàn)步驟。在此12只動(dòng)物中，LAD中段直徑平均狹窄率84.90％±4.24％；靜息超聲心動(dòng)圖示LNEF及LVFS顯著降低(P<0.01)并檢出38個(gè)左室壁異常運(yùn)動(dòng)節(jié)段；這些節(jié)段在DSE中被檢測(cè)出27個(gè)節(jié)段呈典型冬眠心肌“雙相反應(yīng)”，即在低劑量DSE時(shí)室壁運(yùn)動(dòng)功能先

5、改善、而后在中高劑量DSE時(shí)室壁運(yùn)動(dòng)功能又減低；HE染色顯示CHM組心肌纖維腫脹、橫紋模糊、細(xì)胞間質(zhì)成分增加而未見(jiàn)心肌壞死灶。大體標(biāo)本觀察未見(jiàn)大片心肌壞死。 2、慢性冬眠心肌間質(zhì)膠原纖維含量的變化及氯沙坦干預(yù)后的變化術(shù)后28天，PSR染色定性分析顯示假手術(shù)組心肌間質(zhì)、血管周圍見(jiàn)零星分布的膠原纖維；CHM組心肌問(wèn)質(zhì)、血管周圍可見(jiàn)大量膠原纖維，呈不規(guī)則網(wǎng)狀或團(tuán)塊狀；兩種劑量氯沙坦組心肌間質(zhì)、血管周圍有少量膠原纖維。定量分析顯示，與假

6、手術(shù)組比較，CHM組ICVF明顯增加(P<0.01)；與CHM組比較，兩種劑量氯沙坦組ICVF明顯降低(P<0.01)，且大劑量組明顯低于小劑量組(P<0.05)。 3、心肌間質(zhì)Ⅰ型、Ⅲ型膠原纖維比例的變化及氯沙坦干預(yù)后的變化術(shù)后28天，偏振光顯微鏡下觀察假手術(shù)組見(jiàn)少量Ⅰ型、Ⅲ型膠原纖維；CHM組黃紅色雙折光Ⅰ型膠原大量聚集，排列紊亂，少量綠色弱雙折光Ⅲ型膠原，Ⅰ/Ⅲ膠原比例增高；兩種劑量氯沙坦組Ⅰ型膠原較之CHM組明顯減少，Ⅰ

7、/Ⅲ膠原比例有所降低。半定量分析結(jié)果顯示：與假手術(shù)組比較，CHM組P<,Ⅰ/Ⅲ>明顯增加(P<0.01)；與CHM組比較，兩種劑量氯沙坦組P<,Ⅰ/Ⅲ>明顯減少(P<0.01)，且大劑量組明顯低于小劑量組(P<0.05)。 4、心肌組織MMP-2、MMP-9、TIMP-2表達(dá)情況及氯沙坦干預(yù)后的變化術(shù)后28天，免疫組化及Western blot均顯示CHM組術(shù)后MMP-2、MMP-9表達(dá)較假手術(shù)組明顯升高，TIMP-2表達(dá)較假手

8、術(shù)組明顯降低。與CHM組比較，兩種劑量氯沙坦組MMP-2、MMP-9表達(dá)明顯降低，TIMP-2表達(dá)明顯升高，且大劑量組改變程度高于小劑量組(P<0.05)。 5、慢性冬眠心肌細(xì)胞凋亡及氯沙坦干預(yù)后的變化術(shù)后28天，與假手術(shù)組比較，CHM組心肌細(xì)胞Rapo顯著增加(P<0.01)；與CHM組比較，兩種劑量氯沙坦組心肌細(xì)胞Rapo顯著降低(P<0.01)，且大劑量組明顯低于小劑量組(P<0.05)。 6、慢性冬眠心肌心功能的

9、變化及氯沙坦干預(yù)后的變化術(shù)后28天，與假手術(shù)組比較，CHM組左心室整體收縮功能明顯減退，表現(xiàn)為L(zhǎng)VEF、LVFS顯著降低(P<0.01)；與CHM組比較，兩種劑量氯沙坦組LVEF、LVFS均明顯改善，兩種劑量組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論： 1．開(kāi)胸不全結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支中段術(shù)，成功建立了慢性心肌冬眠模型。 2．慢性心肌冬眠過(guò)程發(fā)生的心肌間質(zhì)膠原重塑及心肌細(xì)胞凋亡是心室重塑及心功能減退的重要機(jī)