氯沙坦在抗胰腺纖維化中作用的研究.pdf

1、腎素-血管緊張素系統(tǒng)(reno-angiotensinsystem，RAS)和胰腺纖維化(pancreaticfibrosis)之間關(guān)系是近年頗受關(guān)注的研究熱點之一。眾所周知，RAS系統(tǒng)在人體的血壓維持及電解質(zhì)、體液平衡方面發(fā)揮著重要的作用。而該系統(tǒng)的最終生物活性產(chǎn)物，血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ,ATII)，則是發(fā)揮其作用的最重要物質(zhì)。RAS系統(tǒng)除了在大循環(huán)中存在外，在機體多種組織局部也存在RAS系統(tǒng)，并且通過自分泌和旁分泌

2、的形式影響著器官組織的正常運行，我們稱之為組織RAS系統(tǒng)。在組織RAS系統(tǒng)中，不斷的產(chǎn)生生物活性物質(zhì)，針對不同的組織產(chǎn)生特有的生物作用。既往的研究證實，在胰腺局部也存在著這個系統(tǒng)，研究結(jié)果表明該系統(tǒng)的多種組分，尤其是血管緊張素原(angiotesinogen)及腎素(rennin)，在胰腺局部均有表達并被成功的定位。Chappell在狗胰腺中成功的檢測出ATII、血管緊張素原以及局部的mRNA的存在，從而科學(xué)的證明了胰腺組織RAS的存在

3、。并且在他的試驗中檢測到中等濃度的ATII的存在，并且其局部濃度是ATII在血液中濃度的數(shù)倍。大鼠胰腺炎模型的血管緊張素原mRNA半定量檢測表明，胰腺炎組較對照組明顯增強，約增強四倍左右。血管緊張素原蛋白表達明顯增強，約六倍左右。而它們相應(yīng)受體則無明顯變化，同對照組基本持平。這也為胰腺組織RAS的存在及功能發(fā)揮提供了有力證據(jù)。 RAS系統(tǒng)活性受到多種疾病的影響并增強，如急性胰腺炎、慢性胰腺炎、自身免疫性胰腺炎、胰腺囊性纖維化以及

4、腫瘤等，RAS系統(tǒng)的活性增強可以導(dǎo)致多種直接或者間接的功能的發(fā)揮。實驗顯示，RAS功能影響復(fù)雜而廣泛，它與胰腺的炎癥、β細胞凋亡和死亡、纖維化都存在一定聯(lián)系。所以，RAS在胰腺中發(fā)揮的作用占有重要地位。針對ATIIAT1受體缺陷大鼠的研究顯示，大鼠胰腺在雨蛙素刺激下，轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforminggrowthfactorβ1,TGF-β1)的表達水平較對照組大鼠明顯降低，細胞外基質(zhì)(extracellularmatrix,E

5、CM)各組分的生成也明顯下降。而應(yīng)用血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(angiotensinconvertingenzymeinhibitor,ACEI)、AT-Ⅱ受體拮抗劑或者二者聯(lián)用干預(yù)，自身免疫性慢性胰腺炎大鼠組織病理可見大體外觀較對照組充血明顯減輕，組織病理損害評分顯著降低，ECM生成減少。RT-PCR揭示提示TGF-βmRNA的表達受抑，免疫組化檢測α平滑肌肌動蛋白(α-smoothmuscleactin，α-SMA)及結(jié)蛋白的表6達較

6、對照組有顯著意義的減少。以上實驗的開展提示了RAS系統(tǒng)在胰腺炎發(fā)病中尤其重要的地位，尤其在后期纖維化中的重要影響，其途徑就是通過抑制胰腺星形細胞(pancreaticstellatecells,PSCs)的激活及增生，從而延緩纖維化的進展。以藥物抑制ATII生成及功能活性，將對慢性胰腺炎纖維化產(chǎn)生重要影響。不但如此，阻斷RAS尚可以阻止胰腺腺泡細胞凋亡、組織纖維化的產(chǎn)生。 本課題采用刺激胰腺分泌并阻斷胰腺導(dǎo)管的方法(hypers

7、timulationandobstructionpancreatitis，SHOP)復(fù)制SD大鼠胰腺炎動物模型，應(yīng)用免疫組化、RT-PCR技術(shù)并結(jié)合光鏡、大體觀察等測定方法從組織細胞、基因等水平對急性胰腺炎大鼠模型的纖維化啟動在ATII受體拮抗劑的干預(yù)下的改變情況進行初步探討，為胰腺纖維化的臨床研究提供新的思路。 本實驗研究的主要結(jié)果與結(jié)論如下：1.誘發(fā)的急性胰腺炎大鼠模型，72h對照組和治療組均出現(xiàn)典型的胰腺炎表現(xiàn)(經(jīng)病理檢查

8、證實)，但二組大體表現(xiàn)差異不大；120h，可見對照組胰腺組織明顯水腫，且胰腺包膜可見出血斑塊，而藥物治療組則組織表現(xiàn)相對較輕，包膜表面出血斑塊成細顆粒狀，均勻散布。 2.光鏡檢查可見兩組均出現(xiàn)典型急性胰腺炎組織表現(xiàn)，間質(zhì)水腫充血，腺管擴張，腺泡破壞，間質(zhì)組織增生。但兩組對比無明顯可見差異。 3.免疫組化結(jié)果：對照組和干預(yù)組均出現(xiàn)胰腺星形細胞的激活，表現(xiàn)為α-SMA染色陽性以及膠原染色陽性，第五天均較第三天陽性顯著。對照組

9、和治療組對比發(fā)現(xiàn)，α-SMA染色經(jīng)ImageProPlus軟件分析，無比較差異，干預(yù)組較對照組染色無明顯減輕；Coll-I分布范圍基本同α-SMA，也是隨時間延長染色增強，但經(jīng)統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)亦無明顯差異出現(xiàn)。 4.RT-PCR結(jié)果顯示，TGF-β1、Coll-I的mRNA表達均較正常組明顯增強，經(jīng)quantityone軟件分析可見干預(yù)組TGF-βmRNA表達量較對照組有所減少，而Coll-I的mRNA在72h組變化不明顯，而于120h