氯沙坦對(duì)腎間質(zhì)纖維化及小管上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的抑制作用.pdf

1、背景與目的：腎小管上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化(epithelial-to-mesenchymal transition，EMT)是腎小管間質(zhì)纖維化(TIF，tubulointerstitial fibrosis)的關(guān)鍵發(fā)病機(jī)制，而腎小管間質(zhì)纖維化是慢性腎臟病進(jìn)展為終末期腎病的重要共同通路。血管緊張素Ⅱ AT1受體阻斷劑氯沙坦對(duì)慢性腎臟病具有保護(hù)作用，但其能否抑制腎小管間質(zhì)纖維化及其可能的機(jī)制尚不清楚。本研究包括體內(nèi)實(shí)驗(yàn)及體外實(shí)驗(yàn)兩部分，通過(guò)

2、在體內(nèi)構(gòu)建單側(cè)輸尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction，UUO)大鼠模型以及在體外以TGF-β1誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化，旨在觀察氯沙坦對(duì)腎小管間質(zhì)纖維化以及腎小管上皮細(xì)胞-間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化的抑制作用及其可能機(jī)制，為臨床氯沙坦治療腎小管間質(zhì)纖維化提供新的理論依據(jù)。
　　材料與方法：50只SD大鼠分為三組：假手術(shù)組(n=10)，UUO組(n=20)，UUO氯沙坦治療組(n=20)。術(shù)后氯沙坦治

3、療組予以氯沙坦灌胃，劑量20mg/kg·d，假手術(shù)組及UUO模型對(duì)照組大鼠以等量的生理鹽水灌胃。分別在術(shù)后第7天、14天處死大鼠，留取腎組織標(biāo)本。在體外使用TGF-β1誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞表型改變并給予氯沙坦大鼠含藥血清干預(yù)。氯沙坦大鼠含藥血清按照既定的操作程序獲取。冰凍組織和HK-2細(xì)胞行E-cadherin，Vimentin，α-SMA，β-catenin和ZEB1免疫熒光染色及Western blot分析。采用LC-MS/MS法檢測(cè)用

4、于本研究的氯沙坦大鼠含藥血清中氯沙坦母體及其兩種代謝物(EXP3174，EXP3179)的含量。
　　結(jié)果：1、在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，UUO組大鼠第7天組織病理學(xué)改變?yōu)槟I小管管腔擴(kuò)大，小管萎縮，間質(zhì)增寬及炎細(xì)胞浸潤(rùn)，部分小管間質(zhì)纖維化；第14天間質(zhì)纖維化表現(xiàn)更為嚴(yán)重。與對(duì)照組相比，UUO模型組大鼠腎間質(zhì)第7天、第14天上皮標(biāo)志物E-cadherin表達(dá)顯著下降，而間充質(zhì)標(biāo)志物Vimentin，α-sMA以及與EMT密切相關(guān)的β-caten

5、in和ZEB1表達(dá)增加。與UUO模型組比較，UUO氯沙坦治療組大鼠腎小管間質(zhì)纖維化改變明顯減輕，腎組織E-cadherin表達(dá)增加，Vimentin，α-SMA，β-catenin和ZEB1的表達(dá)減少。2、在體外實(shí)驗(yàn)中，TGF-β1誘導(dǎo)HK-2轉(zhuǎn)化為間充質(zhì)細(xì)胞，細(xì)胞外型有卵圓型轉(zhuǎn)變?yōu)殚L(zhǎng)梭型，上皮標(biāo)志物E-cadherin表達(dá)下調(diào)和間充質(zhì)標(biāo)志物Vimentin表達(dá)上調(diào)，β-catenin在胞漿、胞核的積聚增多以及ZEB1表達(dá)增強(qiáng)；氯沙坦大

6、鼠含藥血清能夠部分抑制TGF-β1誘導(dǎo)的HK-2轉(zhuǎn)化為間充質(zhì)表型，并維持HK-2細(xì)胞的上皮表型，上調(diào)E-cadherin的表達(dá)，下調(diào)Vimentin；同時(shí)抑制β-catenin在胞漿、胞核的積聚以及ZEB1的表達(dá)。3、采用LC-MS/MS法檢測(cè)用于本研究的氯沙坦大鼠含藥血清中氯沙坦母體及其兩種代謝物(EXP3174，EXP3179)的含量中位數(shù)分別為：3176.518ng/ml，2586.772ng/ml，290.429ng/ml。