阿托伐他汀對(duì)大鼠心肌梗死后心肌營(yíng)養(yǎng)素-1的影響.pdf

1、背景和目的 急性心肌梗死(acute myocardial infartion，AMI)后心室重塑(ventricularremodeling)是心室大小、形態(tài)、結(jié)構(gòu)和功能變化的過(guò)程，包括梗死區(qū)心肌壞死產(chǎn)生膨出，非梗死區(qū)心肌肥大和成纖維細(xì)胞的增殖及間質(zhì)膠原的增生、纖維化，最終導(dǎo)致心力衰竭。心室重塑是一復(fù)雜的病理生理過(guò)程，至今其機(jī)制尚未完全闡明。近年來(lái)，眾多細(xì)胞和炎癥因子在心室重塑發(fā)生機(jī)制中的作用受到重視。心肌．營(yíng)養(yǎng)素-1(Car

2、diotrophin-1，CT-1)是一種新近發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞因子，屬于白介素-6(interleukin-6，IL-6)超家族。已有的研究提示， CT-1在AMI后心室重塑中起著重要作用。一方面它可直接促使心肌細(xì)胞肥大和成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)、遷移、分泌Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原。另一方面，CT-1增加局部血管緊張素Ⅱ(angiotensin Ⅱ，Ang Ⅱ)生成，通過(guò)腎素一血管緊張素系統(tǒng)(renin-angiotensinsystem，MS)過(guò)度激活，進(jìn)

3、一步加重心室重塑。他汀類藥物能改善心肌梗死后心力衰竭大鼠模型左室重塑和功能，但他汀類藥物對(duì)大鼠AMI后CT-1和Ang Ⅱ的影響尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立大鼠心肌梗死模型，觀察AMI后CT-1mHNA、AngⅡ、BNP mRNA(心肌肥厚標(biāo)志基因)和Ⅰ型膠原的變化及它們之間的相互關(guān)系，初步探討阿托伐他汀干預(yù)對(duì)它們的影響，為他汀類藥物改善AMI后心室重塑提供新的理論依據(jù)。 材料與方法 (1)模型制作與分組健康清潔級(jí)雄性Wi

4、star大鼠65只，體重240±20g，隨機(jī)分為假手術(shù)組(n=15)和AMI組(n=50)；AMI組通過(guò)結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支(LAD)制作AMI模型， 24h后存活36只，再隨機(jī)分為心梗對(duì)照組(n=18)和阿托伐他汀干預(yù)組(n=18)。阿托伐他汀干預(yù)組每日給以阿托伐他汀(40mg/kg)灌胃，持續(xù)4周，假手術(shù)組和心梗對(duì)照組每日給以等量生理鹽水灌胃。 (2)超聲心動(dòng)圖測(cè)定左室心功能大鼠麻醉后，采用二維超聲心動(dòng)圖，探頭頻率10MHz，采用標(biāo)

5、準(zhǔn)的左室長(zhǎng)、短軸切面，測(cè)定左室舒張末期內(nèi)徑(LVEDd)、左室短軸縮短率(FS)、射血分?jǐn)?shù)(EF)。 (3)免疫組化染色測(cè)定心肌組織I型膠原產(chǎn)量心肌組織石蠟包埋后連續(xù)切片，分別行HE染色及脫蠟水化，滴加稀釋的一抗、二抗，用DAB顯色、封片。采用圖像分析軟件在顯微鏡下分析，鏡下觀察棕黃色為陽(yáng)性。 (4)放射免疫法測(cè)定心肌中Ang Ⅱ濃度左室非梗死區(qū)心肌按要求研磨成勻漿，煮沸、低溫離心后，取上清液采用放射免疫法測(cè)定心肌中An

6、gⅡ濃度。 (5)SYBR Green I Real Time PCR檢測(cè)各組大鼠心肌組織中CT-1、BNPmRNA的表達(dá)①總RNA的提取；②逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)；③標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制及SYBRReal Time PCR反應(yīng)：以cDNA為模板，加入相應(yīng)的引物及SYBR Premix Ex TaqTM，在Gene Amp 5700 Sequence Detector儀上分別對(duì)CT-1、BNP 和管家基因GAPDH(內(nèi)參)進(jìn)行擴(kuò)增，將擴(kuò)增產(chǎn)

7、物倍比稀釋成5個(gè)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，制作CT-1、BNP和GAPDH標(biāo)準(zhǔn)曲線；將待測(cè)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品同時(shí)在Real Time PCR儀(型號(hào)同上)上反應(yīng)，將所得不同Ct值分別代入各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線，電腦自動(dòng)讀出各樣品的起始模板量。再將各樣品CT-1、BNP基因定量結(jié)果與GAPDH基因定量結(jié)果相比進(jìn)行RNA校正，即可得到各組大鼠心肌組織中CT-1、BNPmRNA的相對(duì)表達(dá)量。 結(jié)果 (1)一般情況：4周后，各組大鼠存活情況分別為假手

8、術(shù)組14只、心梗對(duì)照組13只、阿托伐他汀干預(yù)組14只。3組大鼠體重?zé)o顯著性差異(P值均>0.05)；心梗對(duì)照組和阿托伐他汀干預(yù)組大鼠心臟重量、左室重量、心臟重量指數(shù)和左室重量指數(shù)均明顯高于假手術(shù)組(P值均<0.05)，而阿托伐他汀干預(yù)組大鼠上述各指標(biāo)較心梗對(duì)照組顯著降低(P值均<0.05)。 (2)左心功能情況：4周后超聲心動(dòng)圖顯示的各組大鼠左心功能情況為：心梗對(duì)照組和阿托伐他汀干預(yù)組LVEDd明顯高于假手術(shù)組(P值均<0.05

9、)，而LVEF和FS明顯低于假手術(shù)組(P值均<0.05)；與心梗對(duì)照組相比，阿托伐他汀干預(yù)組LVEDd顯著降低(P值<0.05)，LVEF和FS明顯升高(P值均<0.05)。 (3)心梗對(duì)照組和阿托伐他汀干預(yù)組與假手術(shù)組相比，左室非梗死區(qū)Ⅰ型膠原產(chǎn)生、AngⅡ的濃度、CT-1mRNA、BNPmRNA的表達(dá)均明顯增高(P值均<0.05)，而阿托伐他汀干預(yù)組上述指標(biāo)均明顯低于心梗對(duì)照組(P值均<0.05)。 (4)Pearson直線

10、回歸分析表明：心梗對(duì)照組和阿托伐他汀干預(yù)組心肌組織中CT-1mRNA與BNPmRNA表達(dá)均呈正相關(guān)(r=0.747，：r=0.650，P值均<0.05)、CT-1mRNA表達(dá)與Ⅰ型膠原的生成亦均呈正相關(guān)(r=0.687，；r=0.698，P值均<0.05)。心梗對(duì)照組和阿托伐他汀干預(yù)組心肌組織中CT-1mRNA表達(dá)與左室非梗死區(qū)中AngⅡ濃度的變化也呈正相關(guān)(r=0.571，；r=0.651，P值均<0.05)。 結(jié)論