IgA腎病誘騙受體2(DcR2)表達(dá)變化與p16表達(dá)及腎小管間質(zhì)損傷的關(guān)系.pdf

1、研究背景與目的
　　IgA腎病是亞裔青壯年最常見的慢性腎臟病之一,25~30％的患者在診斷 IgA腎病后經(jīng)過10~20年的進(jìn)展,最終進(jìn)入終末期腎臟病。目前導(dǎo)致 IgA腎病進(jìn)展的機(jī)制尚未完全闡明,臨床仍缺乏有效治療方法。
　　在慢性腎臟病特別是 IgA腎病中,均可以觀察到應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞早衰(stress induced premature senescence,SIPS)的發(fā)生。SIPS是致病因素觸發(fā)的不依賴增齡的細(xì)胞加速衰老

2、,表現(xiàn)為細(xì)胞生長(zhǎng)周期不可逆停滯導(dǎo)致的細(xì)胞增殖和再生能力的永久性喪失,使組織抗損傷以及修復(fù)能力減弱,器官功能減退。衰老細(xì)胞呈現(xiàn)衰老相關(guān)分泌表型(senescence-associated secretory phenotype,SASP),通過產(chǎn)生大量促炎因子、趨化因子、生長(zhǎng)因子以及細(xì)胞基質(zhì)等物質(zhì),損害鄰近細(xì)胞,引起組織局部炎癥反應(yīng)和纖維化。目前研究認(rèn)為 SIPS是疾病進(jìn)展的重要細(xì)胞事件,在腫瘤、糖尿病及其并發(fā)癥、心腦血管疾病以及組織器官

3、纖維化等疾病的發(fā)生發(fā)展中都發(fā)揮了非常關(guān)鍵作用。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)隨著IgA腎病加重,p16 Ink4a、SA-β-gal陽(yáng)性腎小管上皮細(xì)胞增加,同時(shí)細(xì)胞外基質(zhì)III型膠原(type III collagen,Col III)和纖連蛋白(fibronectin,FN)表達(dá)增加,由此促進(jìn)IgA腎病間質(zhì)纖維化,加速疾病的進(jìn)展。這一發(fā)現(xiàn)提示IgA腎病存在著SIPS現(xiàn)象,腎小管上皮細(xì)胞SIPS可能是IgA腎病進(jìn)展的重要病理基礎(chǔ)。Transl Re

4、s雜志發(fā)表述評(píng)認(rèn)為我們對(duì)腎小管上皮細(xì)胞 SIPS的研究推進(jìn)了對(duì) CKD進(jìn)展機(jī)制的認(rèn)識(shí)。由于目前細(xì)胞衰老標(biāo)志物的局限性,細(xì)胞衰老無法用單一指標(biāo)進(jìn)行明確,多采用幾種標(biāo)志聯(lián)合確定某一細(xì)胞是否屬于衰老細(xì)胞。因此進(jìn)一步驗(yàn)證IgA腎病存在SIPS,并尋找新的腎小管上皮細(xì)胞更為特異性衰老標(biāo)志物對(duì)研究SIPS有著重要意義。
　　誘騙受體2(Decoy receptor2,DcR2)是 TNF相關(guān)的凋亡誘導(dǎo)配體(TNF-related apopto

5、sis-inducing ligand,TRAIL)的受體之一,位于細(xì)胞膜表面,參與調(diào)控細(xì)胞凋亡。目前認(rèn)為 DcR2是細(xì)胞凋亡抵抗的重要原因。衰老細(xì)胞的特征之一即為凋亡抵抗,這也是衰老細(xì)胞清除延遲并滯留于病變局部,導(dǎo)致疾病遷延和進(jìn)展的重要原因。最近發(fā)現(xiàn),DcR2在惡變前腫瘤細(xì)胞、成纖維細(xì)胞衰老時(shí)其表達(dá)增加,可作為細(xì)胞衰老的標(biāo)志,并可能是衰老細(xì)胞凋亡抵抗的重要原因。DcR2在大部分組織中均有表達(dá),但主要在腎臟、睪丸表達(dá),在培養(yǎng)的腎小管上皮

6、細(xì)胞HK2及糖尿病腎病大鼠腎小管上皮細(xì)胞可檢測(cè)到DcR2的表達(dá)。但目前DCR2與腎臟病的研究很少,僅有DcR2在糖尿病腎病大鼠模型中高表達(dá)并抑制腎小管上皮細(xì)胞凋亡的報(bào)道,其在IgA腎病中的表達(dá)情況,是否可作為腎小管上皮細(xì)胞衰老的標(biāo)志及與疾病進(jìn)展的關(guān)系尚缺乏相關(guān)研究。本研究旨在通過探索DcR2與IgA腎病腎小管上皮細(xì)胞應(yīng)激性衰老的關(guān)系及其表達(dá)變化與腎組織損傷程度的相關(guān)性,從而證明IgA腎病衰老腎小管上皮細(xì)胞DcR2表達(dá)升高,其表達(dá)水平是判

7、斷IgA腎臟進(jìn)展的重要指標(biāo)。
　　有鑒于此,本研究共分三部分。第一部分選取116例IgA腎病患者,分析納入病例的臨床特征;第二部分檢測(cè)細(xì)胞衰老相關(guān)標(biāo)志物SA-β-Gal、p16Ink4a、DcR2在IgA腎病腎組織中的表達(dá)與共表達(dá)情況;第三部分進(jìn)一步探討細(xì)胞衰老相關(guān)標(biāo)志物 SA-β-Gal、p16Ink4a、DcR2與IgA腎病臨床指標(biāo)與腎組織損傷評(píng)分的相關(guān)性。
　　研究方法和主要結(jié)果結(jié)論如下:
　　方法
　　1

8、、臨床資料:選取2013年1月至2013年9月在我院腎內(nèi)科住院經(jīng)腎活檢病理診斷為原發(fā)性IgA腎病患者116例,根據(jù)IgAN牛津病理分級(jí)中腎小管萎縮/間質(zhì)纖維化評(píng)分將患者分為T0、T1、T2三組。對(duì)照組為18至50歲之間腎錯(cuò)構(gòu)瘤患者13例,取腎臟切除后遠(yuǎn)離瘤體腎組織作為對(duì)照。分別收集各組患者臨床資料及檢查結(jié)果,使用CKD-EPI公式進(jìn)行計(jì)算估計(jì)的腎小球?yàn)V過率(estimated Glomerular Filtration Rate, eG

9、FR),收集所有患者血清及24小時(shí)尿液。
　　2、腎組織損傷病理評(píng)分:使用 IgA腎病牛津病理分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)對(duì) IgA腎病病理進(jìn)行評(píng)分。
　　3、檢測(cè)指標(biāo)與方法
　　(1) SA-β-Gal試劑盒腎組織SA-β-Gal表達(dá)情況。
　　(2)免疫組化檢測(cè)腎組織p16Ink4a、DcR2表達(dá)。
　　(3)免疫熒光檢測(cè)腎組織DcR2和p16Ink4a共表達(dá)情況。
　　4、結(jié)果判讀方法
　　結(jié)果的判讀均采用盲

10、法進(jìn)行,由2名與本研究無關(guān)人員按下列方法判讀:
　　計(jì)數(shù)連續(xù)10個(gè)高倍視野下 DcR2、p16Ink4a呈陽(yáng)性表達(dá)的腎小管上皮細(xì)胞,計(jì)算DcR2、p16Ink4a陽(yáng)性表達(dá)占腎小管上皮細(xì)胞總數(shù)的百分比例。
　　計(jì)數(shù)連續(xù)10個(gè)高倍視野下SA-β-gal呈陽(yáng)性表達(dá)的腎小管數(shù),計(jì)算SA-β-gal陽(yáng)性表達(dá)占腎小管總數(shù)的百分比例。
　　激光共聚焦顯微鏡下觀察并計(jì)數(shù)腎小管上腎小管上皮細(xì)胞 p16Ink4a、DcR2雙陽(yáng)性細(xì)胞占腎小

11、管上皮細(xì)胞總數(shù)的百分比。
　　5、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)使用SPSS20.0軟件處理,以p<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果
　　一、116例IgA腎病患者的臨床特征
　　IgA腎病患者中T0組79例、T1組24例、T2組13例。IgA腎病患者各組間及與對(duì)照組比較年齡、性別、BMI均無顯著差異。與對(duì)照組比較,T0組膽固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、尿NAG、尿蛋白/尿肌酐顯著高于對(duì)照組(p<0.05)

12、。T1組膽固醇、低密度脂蛋白、血肌酐、尿素氮、尿酸、尿 NAG、尿蛋白/尿肌酐顯著高于對(duì)照組(p<0.05),白蛋白、eGFR顯著低于對(duì)照組(p<0.05)。T2組收縮壓、舒張壓、平均動(dòng)脈壓、膽固醇、低密度脂蛋白、血肌酐、尿素氮、尿酸、尿 NAG、尿蛋白/尿肌酐顯著高于對(duì)照組(p<0.05),白蛋白、eGFR顯著低于對(duì)照組(p<0.05)。與T0組比,T1組甘油三酯、血肌酐、尿素氮、尿素顯著高于T0組,白蛋白、eGFR顯著低于T1組(p

13、<0.05)。與T1組比較,T2組收縮壓、舒張壓、平均動(dòng)脈壓、血肌酐、尿素氮、尿酸顯著高于T1組(p<0.05),eGFR顯著低于T1組(p<0.05)。IgA腎病各組間尿蛋白/尿肌酐未見統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異。
　　二、SA-β-Gal、p16Ink4a、DcR2在IgA腎病腎組織中的表達(dá)與共表達(dá)情況
　　1、IgA腎病患者腎組織細(xì)胞衰老相關(guān)標(biāo)志物表達(dá)顯著增高:
　　(1) SA-β-Gal陽(yáng)性細(xì)胞主要為腎小管上皮細(xì)胞,正常

14、腎組織低表達(dá)SA-β-Gal, IgA腎病腎組織SA-β-Gal表達(dá)增加。IgA腎病腎小管SA-β-Gal陽(yáng)性率較正常對(duì)照組顯著升高,且隨著腎小管萎縮/間質(zhì)纖維化評(píng)分增加而升高。
　　(2) p16Ink4a可在腎小管上皮細(xì)胞、腎小球細(xì)胞、腎間質(zhì)細(xì)胞表達(dá),正常腎組織p16Ink4a低表達(dá),IgA腎病腎組織 p16Ink4a表達(dá)增加。p16Ink4a陽(yáng)性腎小管上皮細(xì)胞百分比、腎小球細(xì)胞百分比、腎間質(zhì)細(xì)胞百分比較正常對(duì)照組顯著升高,且

15、隨著腎小管萎縮/間質(zhì)纖維化評(píng)分增加而升高。
　　(3)免疫組化染色提示DcR2僅在腎小管上皮細(xì)胞表達(dá),正常腎組織腎小管上皮細(xì)胞DcR2低表達(dá),IgA腎病腎組織腎小管上皮細(xì)胞DcR2表達(dá)增加。DcR2的表達(dá)趨勢(shì)與 SA-β-Gal及 p16Ink4a的表達(dá)趨勢(shì)一致:在正常腎組織低表達(dá),隨著腎小管萎縮/間質(zhì)纖維化評(píng)分增加而升高。進(jìn)一步對(duì)連續(xù)切片下IgA腎病各組DcR2和p16Ink4a表達(dá)分布情況進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn),p16Ink4a腎小管上

16、皮細(xì)胞陽(yáng)性分布與DcR2陽(yáng)性分布類似。
　　2、腎組織DcR2、p16Ink4a共表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞:免疫熒光共染可見DcR2與p16Ink4a共表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞,DcR2表達(dá)量較p16Ink4a低,未見DcR2陽(yáng)性p16Ink4a陰性腎小管上皮細(xì)胞,其共表達(dá)率隨著腎小管萎縮/間質(zhì)纖維化評(píng)分增加而升高。
　　三、SA-β-Gal、p16Ink4a、DcR2與IgA腎病臨床指標(biāo)與腎組織損傷評(píng)分的相關(guān)性。
　　1、相

17、關(guān)性分析提示IgA腎病患者腎小管上皮細(xì)胞p16Ink4a、SA-β-Gal、DcR2陽(yáng)性率與血壓、尿 NAG、尿酸、尿素氮、血肌酐、尿蛋白/尿肌酐呈正相關(guān),與 eGFR呈負(fù)相關(guān),與年齡、BMI、白蛋白及血脂水平無相關(guān)性。
　　2、IgA腎病腎小管上皮細(xì)胞p16Ink4a、SA-β-Gal、DcR2表達(dá)與腎小球節(jié)段硬化、間質(zhì)纖維化、弓動(dòng)脈/小葉間動(dòng)脈硬化、小動(dòng)脈玻璃樣變顯著相關(guān),而與系膜細(xì)胞增生、毛細(xì)血管內(nèi)細(xì)胞增生評(píng)分無相關(guān)性。