HOXD10基因在人類乳腺癌中的表達(dá)研究.pdf

1、目的：探討同源異型盒基因HOXD10基因在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展進(jìn)程中的作用，及其表達(dá)異常與臨床病理參數(shù)之間的相關(guān)性。 方法： 1、收集44例新鮮乳腺癌組織及16例乳腺良性病變組織標(biāo)本，將其分為乳腺癌組及乳腺良性病變組，組織離體后20分鐘內(nèi)置于液氮中，后轉(zhuǎn)入一80℃冰箱保存。 2、采用Trizol法抽提組織總RNA，提取得到的RNA采用M-MIV逆轉(zhuǎn)錄試劑盒逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈。 3、從GeneBank檢索

2、human 18s rRNA和HOXD10基因的全長序列，采用oligo 6.0引物設(shè)計軟件分別設(shè)計18s rRNA和HOXD10基因的引物。 4、以cDNA為模板，經(jīng)PCR反應(yīng)分別擴(kuò)增18s rRNA和HOXD10基因片斷，制備相對定量標(biāo)準(zhǔn)品。5、以逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA為模板，進(jìn)行實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Realtime RT-PCR)，檢測44例乳腺癌組織及16例乳腺良性病變組織HOXD10 mRNA表達(dá)，并分析HO

3、XD10mRNA表達(dá)與乳腺癌臨床病理資料間的相關(guān)性。 結(jié)果： 1、用制備的相對定量標(biāo)準(zhǔn)品繪制的實時熒光定量：RT-PCR試驗的標(biāo)準(zhǔn)曲線，HOXD10基因標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率(slope)為-4.120，相關(guān)系數(shù)(correlationcoefficient)為1.00。18s rRNA基因熒光定量RT-PCR試驗的標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率(slope)為-3.863，相關(guān)系數(shù)(correlation coefficient)為1.00。均符

4、合要求。 2、HOXD10mRNA在乳腺癌中表達(dá)范圍為3.26～75.00，均值為25.25，在乳腺良性病變中表達(dá)范圍為11.98～162.50，均值為78.32。乳腺癌中HOXD10 mRNA的表達(dá)明顯低于乳腺良性病變，兩組間有顯著差異(P<0.01)。 3、組織學(xué)分級為Ⅲ級的標(biāo)本中HOXD10 mRNA的表達(dá)明顯低于其它2個組別。 4、HOXD10 mRNA的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小、TNM分期之間未見相關(guān)

5、性(P>0.05)。 結(jié)論： 1、乳腺癌組織HOXD10 mRNA表達(dá)明顯降低，且組織學(xué)分級為Ⅲ級的標(biāo)本中HOXD10 mRNA的表達(dá)明顯低于其它2個組別，考慮該基因可能為乳腺癌發(fā)生發(fā)展的抑制因子，提示我們對該基因應(yīng)該給予更多關(guān)注。 2、本次實驗未發(fā)現(xiàn)HOXD10 mRNA表達(dá)減少與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小、TNM分期之間有明顯相關(guān)性，此結(jié)論仍需進(jìn)一步行大樣本實驗證實。 3、本實驗所用SYBR GREENⅠ實