冠心病合并高甘油三酯血癥患者LPL基因突變分析.pdf

1、研究背景與目的：
　　冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病(coronary heart disease，CHD)是威脅人類健康的主要疾病之一。在冠心病的病理進(jìn)程中，血脂代謝異常是冠心病的主要發(fā)病機(jī)制，其中高甘油三酯血癥（hypertriglyceridemia，HTG）與冠心病的的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。研究表明遺傳性高甘油三酯血癥可以由多種基因突變引起，其中脂蛋白酯酶(lipoprotein lipase，LPL)是甘油三酯代謝途徑的限速酶，

2、在甘油三酯代謝中起重要作用。近年研究表明LPL基因突變?cè)诠谛牟〉陌l(fā)生發(fā)展中起重要作用。為探討LPL基因突變和基因多態(tài)性對(duì)冠心病發(fā)病的影響，我們對(duì)山東地區(qū)漢族人群CHD患者中HTG病人進(jìn)行LPL基因外顯子突變篩選，從分子水平尋找LPL基因序列改變，為預(yù)防和治療冠心病提供了新的基因分子靶點(diǎn)。
　　研究對(duì)象及方法：
　　研究對(duì)象:病例組研究對(duì)象為聊城市人民醫(yī)院心內(nèi)科住院病人，正常對(duì)照組為聊城市人民醫(yī)院體檢中心的正常健康人。所有研究

3、對(duì)象均為漢族，研究個(gè)體間無血緣關(guān)系，且均排除肝、腎、腫瘤、甲狀腺疾病。從1200例冠心病病人中篩選出120例高甘油三酯血癥患者，并選擇年齡性別及生活條件相同的對(duì)照組正常人118例。實(shí)驗(yàn)方法:病人和對(duì)照均按照要求填寫知情同意書。所有研究對(duì)象在空腹12小時(shí)以上時(shí)，采集3ml靜脈血于EDTAK2抗凝管中，分離提取基因組DNA，按照LPL基因序列設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增LPL基因的9個(gè)編碼外顯子，用PCR法對(duì)其LPL基因的外顯子目的片段進(jìn)行擴(kuò)增，經(jīng)凝膠電泳

4、確認(rèn)得到PCR產(chǎn)物后，用ABI3700進(jìn)行DNA測序分析。
　　結(jié)果：
　　在120例合并高甘油三酯血癥的冠心病患者中，我們發(fā)現(xiàn)LPL基因外顯子8和9上存在兩種變異，一種為外顯子8中的c.1164C→A突變(Thr388→Thr)，未改變氨基酸序列，為同義突變，其中雜合突變?yōu)?5例，純合突變?yōu)?例;另一種為外顯子9存在的c.1421 C→G突變(Ser447→Ter)，產(chǎn)生終止密碼子，其中發(fā)現(xiàn)雜合突變14例，純合突變1例;另

5、外發(fā)現(xiàn)LPL基因內(nèi)含子5種突變: c.429+20A＞C，c.430-6C＞T，c.430-34C＞A，c.775+3T＞C，c.1140-7T＞G，均為雜合突變。未發(fā)現(xiàn)已報(bào)道的脂蛋白酯酶催化活性中心Asp156-His241-Ser132(外顯子4及5)的突變。在118例正常對(duì)照組中，外顯子9上的Ser447→Ter突變，共發(fā)現(xiàn)22例，全部為雜合突變，由于此突變?cè)谡Ｈ酥型瑯哟嬖?，表明此終止密碼子突變屬于基因多態(tài)性。我們對(duì)以上LPL基

6、因突變的發(fā)生率進(jìn)行計(jì)算，結(jié)果表明:
　　1.LPL基因編碼區(qū)外顯子8突變Thr388→Thr及外顯子9突變Ser447→Ter存在于我們研究的漢族人群中。其中外顯子9突變Ser447→Ter基因型分布為:CC型占84.45％(201例)，CG型占15.13％(36例)，GG型占0.42％(1例)。冠心病組和正常對(duì)照群體等位基因頻率符合Hardy-Weinberg平衡(x2=0.46875，1.2471，df=1，P＝0.9333，

7、0.90678)，可以認(rèn)為具有人群代表性。
　　2.LPL基因突變Ser447→Ter在中青年組（＜60歲）和老年組（≥60歲）兩個(gè)年齡組的分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(x2=1.743，0.044:; df=2，1;P=0.418，0.835;)
　　3.LPL基因突變Ser447→Ter在男女性別組的分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.976，0.022:; df=2,1;P=0.614,0.882;)。
　　4.對(duì)于LPL

8、基因突變Ser447→Ter，冠心病組與正常人組等位基因的頻率差異無顯著性(x2=1.711，df=1，P＝0.191)。冠心病組和正常人組三種基因型頻率無顯著性差異(x2=3.164，d f=2，P=0.206)。X基因型攜帶者與非攜帶者罹患冠心病的風(fēng)險(xiǎn)無顯著差異(OR=1.426;95％CI=0.729～2.788; P=0.298)。
　　結(jié)論：
　　本研究發(fā)現(xiàn)LPL基因編碼區(qū)外顯子8基因突變Thr388→Thr及外顯

9、子9基因突變Ser447→Ter存在于山東漢族人群中。冠心病組高甘油三酯血癥病人及正常人的LPL基因編碼區(qū)基因突變Ser447→Ter無年齡和性別差異，表明此突變屬于基因多態(tài)性。同時(shí)發(fā)現(xiàn)冠心病組高甘油三酯血癥病人及正常人LPL基因編碼區(qū)Ser447→Ter等位基因頻率、三種基因型頻率無顯著性差異。此研究未發(fā)現(xiàn)高甘油三酯血癥病人中LPLSer447→Ter基因突變明顯高于正常人，并不排除LPL其它基因突變?cè)诟吒视腿パY發(fā)生中的作用，今后