硫化氫對(duì)尿源性膿毒血癥腎組織細(xì)胞因子表達(dá)的影響.pdf

1、目的
　　建立尿源性膿毒血癥兔模型；通過應(yīng)用硫化氫干預(yù),比較兔腎組織細(xì)胞因子的表達(dá)，明確外源性硫化氫對(duì)膿毒血癥兔模型腎組織細(xì)胞因子的影響，從而揭示硫化氫在尿源性膿毒血癥腎組織中發(fā)揮作用的可能機(jī)制。
　　方法
　　1、家兔左側(cè)輸尿管內(nèi)注入大腸桿菌（ATCC25922），并結(jié)扎左側(cè)輸尿管遠(yuǎn)端，模擬上尿路急性梗阻并感染所致膿毒血癥兔模型。
　　2、將48只健康雄性家兔隨機(jī)分成4組，每組12只。正常組（Control組）

2、；假手術(shù)組（Sham組）；膿毒血癥組（Sepsis組）；硫氫化鈉組（NaHS組）。
　　3、每組動(dòng)物按時(shí)間點(diǎn)又分為術(shù)后12小時(shí)、術(shù)后24小時(shí)、術(shù)后36小時(shí)、術(shù)后48小時(shí)4個(gè)時(shí)間點(diǎn)。分別于每個(gè)時(shí)間點(diǎn)觀測(cè)肛溫（RT）、呼吸（RR）、心率（HR）。
　　4、術(shù)前、術(shù)后12小時(shí)、術(shù)后24小時(shí)、術(shù)后36小時(shí)、術(shù)后48小時(shí)分別采血行外周血細(xì)胞計(jì)數(shù)分析（WBC、中性粒細(xì)胞）、腎功能（Cr、BUN）測(cè)定。
　　5、術(shù)后12小時(shí)、24小

3、時(shí)、36小時(shí)、48小時(shí)各組家兔腎組織分別行HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察形態(tài)結(jié)構(gòu)變化。Western blot法檢測(cè)各組腎組織TNF-α、IL-10的蛋白表達(dá)。RT-PCR（reverse translation-PCR）法檢測(cè)NF-κB的基因表達(dá)。
　　結(jié)果
　　1、一般情況：sham組的體溫、心率、呼吸頻率在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)上與control組比較，變化不大（P>0.05）；隨造模時(shí)間的延長(zhǎng)，sepsis組明顯高于control、

4、sham組（P<0.05），并呈上升趨勢(shì)，NaHS組略低于sepsis組（P<0.05）。
　　2、血液檢測(cè)指標(biāo)：各組術(shù)前的血細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC、中性粒細(xì)胞）、Cr、Bun比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。control組的血細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC、中性粒細(xì)胞）、Cr、Bun在12h、24h、36h、48h與sham組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；隨著造模時(shí)間的延長(zhǎng)，sepsis組明顯高于control、sham組（P<0.05），并呈上

5、升趨勢(shì)，NaHS組與sepsis組比較，有下降趨勢(shì)，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　3、病理形態(tài)學(xué)：HE染色光鏡下可見sepsis組腎組織大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，腎小球萎縮、腎小囊擴(kuò)張，腎小管管腔變大。NaHS組較sepsis組上述變化有所減輕。
　　4、Western Blot法檢測(cè)腎組織TNF-α、IL-10的蛋白表達(dá)：Control組腎組織TNF-α的蛋白表達(dá)和sham組相比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；s

6、epsis組明顯高于control、sham組，隨造模時(shí)間延長(zhǎng)，呈上升趨勢(shì)（P<0.05）；NaHS組與sepsis組比較，有下降趨勢(shì)（P<0.05）。
　　Control組腎組織 IL-10的蛋白表達(dá)和sham組相比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；sepsis組明顯高于control、sham組，隨造模時(shí)間延長(zhǎng)，呈上升趨勢(shì)（P<0.05）；NaHS組與sepsis組比較，仍呈現(xiàn)上升趨勢(shì)（P<0.05）。
　　5、RT

7、-PCR（reverse translation-PCR）法檢測(cè)NF-κB的基因表達(dá)：Control組NF-κB的基因表達(dá)和sham組相比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；sepsis組高于control、sham組，隨造模時(shí)間延長(zhǎng)，呈現(xiàn)上升趨勢(shì)（P<0.05）；NaHS組與sepsis組比較，有下降趨勢(shì)（P<0.05）。
　　結(jié)論
　　1、成功建立尿源性膿毒血癥兔模型。
　　2、外源性硫化氫抑制尿源性膿毒血癥模型