RIPK4表達(dá)與舌鱗癌臨床特點(diǎn)及生物學(xué)特性之間的關(guān)系.pdf

1、目的：
　　口腔鱗狀細(xì)胞癌(OSCC)是全球第六大常見(jiàn)癌癥[1]，主要發(fā)生在舌、頰、牙齦、腭、上頜竇。臨床以舌鱗狀細(xì)胞癌(TSCC)最常見(jiàn)，其五年生存率較低(48.0％～70.9％)，腫瘤局部控制率也較低[4]。目前對(duì)TSCC的腫瘤發(fā)生的機(jī)制尚不清楚。
　　RIPK4（Receptor-interacting serine/threonine kinase protein4）首次發(fā)現(xiàn)于酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)中蛋白激酶C(PKC)β1

2、和PKCδ交互的一種蛋白[5，6]。不正常的表皮細(xì)胞分化導(dǎo)致RIPK4缺陷小鼠圍產(chǎn)期死亡。RIPK4-/-小鼠表皮棘突層和顆粒層增厚，從而使表皮增厚，在最外層含有角化不全細(xì)胞，而不是無(wú)核鱗狀上皮細(xì)胞。RIPK4可自發(fā)調(diào)控表皮細(xì)胞的分化[10]。RIPK4是一種錨蛋白，含有重復(fù)序列的蛋白激酶，在細(xì)胞分化[10]和皮膚炎癥[11-13]中是必不可少的。
　　本研究的目的是探索RIPK4表達(dá)與舌鱗癌臨床特點(diǎn)及其生物學(xué)特性的關(guān)系。

3、　　方法：
　　本研究收集的109例組織標(biāo)本取自浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院口腔頜面外科及病理科，2006年1月至2012年12月期間手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)。其中有73例舌鱗狀細(xì)胞癌患者的癌組織及36例與其相對(duì)應(yīng)舌部手術(shù)切除的癌旁正常組織。根據(jù)WHO病理分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，這些舌癌患者中有32例為高分化腫瘤，23例中分化腫瘤，18例低分化腫瘤。其中有20例發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。所有的患者手術(shù)前均未接受過(guò)放療，化療，或任何其他介入性姑息治療等抗腫瘤治療

4、，并經(jīng)過(guò)了當(dāng)?shù)貍惱砦瘑T會(huì)的批準(zhǔn)。所有標(biāo)本為腫瘤的中心部分并粉碎在液氮冷研缽或固定在10％福爾馬林中并包埋在石蠟中。臨床收集患者的性別，年齡，學(xué)歷，飲酒、抽煙習(xí)慣，高血壓、糖尿病病史，及是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等相關(guān)參數(shù)。石蠟包埋切片，兔抗RIPK4單克隆抗體免疫組織化學(xué)染色，并用多元回歸分析RIPK4表達(dá)水平與腫瘤分化程度及各種臨床特點(diǎn)是否存在關(guān)聯(lián)。人舌鱗癌細(xì)胞系TCA-8113轉(zhuǎn)染pRIPK4或pRIPK4-shRNA質(zhì)粒后，對(duì)其表達(dá)量做熒光

5、實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)mRNA表達(dá)，WesternBlot檢測(cè)RIPK4蛋白水平表達(dá)變化。劃痕實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)觀察RIPK4表達(dá)改變后細(xì)胞遷移能力和細(xì)胞侵襲能力是否改變。
　　結(jié)果：
　　RIPK4在癌旁正常組織和正常舌上皮細(xì)胞中正常表達(dá)。高分化腫瘤RIPK4表達(dá)水平高，低分化RIPK4表達(dá)水平明顯下降，高分化舌鱗癌的RIPK4的平均分值為2，中分化為1.2，低分化為0.54。癌旁正常組織RIPK4 mRNA水平均高于不同分化

6、程度舌鱗癌。表明RIPK4水平與舌鱗癌分化程度顯著相關(guān)。RIPK4水平與患者年齡相關(guān)(r=0.66，P=0.04)，患者31～55歲平均值為1.13，56～69歲平均值為1.65(R=0.03，P＜0.01)。RIPK4水平和性別之間有顯著的關(guān)聯(lián)。男性有較高RIPK4水平（P=0.03，卡方檢驗(yàn)）。而教育程度，酗酒，吸煙，糖尿病，高血壓和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移對(duì)RIPK4水平?jīng)]有影響。我們轉(zhuǎn)染pRIPK4， pNC-shRNA，或pRIPK4-sh

7、RNA的進(jìn)入TCA-8113細(xì)胞。四組不同的RIPK4轉(zhuǎn)染率均大于60％，并沒(méi)有表現(xiàn)出任何的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)RIPK4 mRNA的表達(dá)，TCA-8113的侵襲和遷移能力進(jìn)行了測(cè)定，發(fā)現(xiàn)RIPK4表達(dá)下降后其遷移和侵襲能力顯著增加。這些結(jié)果表明，RIPK4在舌鱗癌細(xì)胞系TCA8113的遷移和侵襲中起重要作用。共聚焦激光掃描圖像顯示，正常舌組織和NOK細(xì)胞胞漿中RIPK4強(qiáng)烈表達(dá)，而在舌鱗癌樣品和TCA8113細(xì)胞中其表達(dá)水平顯著下降。