miR-21在宮頸鱗癌中表達(dá)與其生物學(xué)特性的研究.pdf

1、目的：
　　宮頸癌是女性常見的生殖道惡性腫瘤之一,其發(fā)病率居女性惡性腫瘤第二位,復(fù)發(fā)合并轉(zhuǎn)移的晚期宮頸癌患者的治療一直是臨床難題,預(yù)后差,嚴(yán)重威脅婦女健康。本研究通過實時熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測miR-21在宮頸上皮內(nèi)瘤變組織和宮頸鱗癌組織中的表達(dá),觀察miR-21在宮頸鱗狀上皮惡變過程的不同階段的表達(dá)情況,分析其與宮頸鱗癌患者的HPV類型、臨床病理資料之間的關(guān)系;通過下調(diào)宮頸鱗癌SiHa細(xì)胞中miR-21的表達(dá),研究

2、miR-21對宮頸鱗癌SiHa細(xì)胞的生長、增殖、凋亡、細(xì)胞周期及遷移能力的影響,為宮頸鱗癌的發(fā)病機(jī)制研究提供新思路,為尋找宮頸鱗癌新的治療靶點及靶向基因治療提供基礎(chǔ)實驗依據(jù)。
　　方法：
　　第一部分:收集2010年4月至2012年4月廣東省婦幼保健院婦科經(jīng)手術(shù)后病理確診為宮頸鱗狀細(xì)胞癌60例、中重度宮頸上皮內(nèi)瘤變(CINII-III)30例和正常宮頸組(同期因其它良性腫瘤行全子宮切除術(shù)的患者)30例,分別切取相對應(yīng)的宮頸石

3、蠟組織,采用qRT-PCR方法檢測miR-21的表達(dá),進(jìn)一步分析其與宮頸鱗癌患者HPV類型及臨床病理資料之間的關(guān)系。
　　第二部分:通過瞬時轉(zhuǎn)染miR-21抑制劑,下調(diào)宮頸鱗癌SiHa細(xì)胞miR-21的表達(dá),經(jīng)qRT-PCR、四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法、流式細(xì)胞術(shù)、平板克隆和Transwell小室法,探討miR-21對SiHa細(xì)胞生物學(xué)特性(細(xì)胞生長、增殖、凋亡、周期及遷移)的影響。
　　結(jié)果：
　　1.本研究發(fā)現(xiàn),相

4、對于正常宮頸組織,miR-21在CINII-III、SCC組織中的表達(dá)明顯上升,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);SCC組與CINII-III組相比,miR-21表達(dá)水平也升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　2.miR-21的表達(dá)在HPV16型陽性宮頸鱗癌組織中明顯上調(diào)(P<0.05);結(jié)合臨床病理資料,相對于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸鱗癌組織,miR-21在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸鱗癌組織中的表達(dá)上升1.61倍(P<0.05),而m

5、iR-21的表達(dá)與宮頸鱗癌患者是否先期放化療、分化程度、宮頸間質(zhì)浸潤深度、是否脈管浸潤和有無宮旁浸潤的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　3.體外實驗證明,相對于陰性對照組,轉(zhuǎn)染miR-21ASO(miR-21抑制劑)后,qRT-PCR結(jié)果顯示,miR-21在SiHa細(xì)胞中的表達(dá)下調(diào)60％,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。陰性對照組與空白對照組相比,miR-21的相對表達(dá)量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　4.M

6、TT結(jié)果顯示,miR-21ASO組與陰性對照組相比,SiHa細(xì)胞的存活率明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);尤其在轉(zhuǎn)染后48h生長抑制最為明顯,細(xì)胞存活率分別為(91.92±8.19)%、(36.76±11.18)%。而陰性對照組與空白對照組細(xì)胞存活率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　5.miR-21ASO組與陰性對照組的細(xì)胞克隆形成率分別為(83.00士2.60)%、(50.70士4.50)%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P

7、<0.05)。
　　6.轉(zhuǎn)染miR-21抑制劑48小時后,經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示,miR-21ASO組凋亡率較陰性對照組升高(P<0.05),但細(xì)胞各周期分布比例的差別無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
　　7.在200倍鏡視野下,miR-21ASO組與陰性對照組SiHa細(xì)胞的遷移細(xì)胞數(shù)分別為30.87±6.77、54.00±3.65,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);而空白對照組與陰性對照組的遷移穿膜細(xì)胞數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(

8、P>0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.miR-21在正常宮頸組、CINII-III及SCC組織中的表達(dá)逐漸升高,并且在HPV16型陽性的宮頸鱗癌和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的宮頸鱗癌組織中過表達(dá)。說明miR-21可能參與了宮頸鱗狀上皮惡變轉(zhuǎn)化過程,其作用機(jī)制可能為miR-21與HPV16型相互作用有關(guān)。
　　2.下調(diào)miR-21的表達(dá),可抑制宮頸鱗癌細(xì)胞的生長、增殖和遷移能力,促進(jìn)凋亡,但細(xì)胞周期無明顯改變,表明miR-21可能在宮