凋亡相關(guān)基因及其交互作用與食管鱗癌生物學(xué)特性的臨床研究.pdf

1、目的：1）通過研究食管鱗癌不同組織部位膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-166（TMEM166）在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)與食管鱗癌不同組織部位細(xì)胞早期凋亡率，探討TMEM166與食管鱗癌不同組織部位細(xì)胞早期凋亡率的關(guān)系；2）通過研究食管鱗癌不同組織部位中程序化細(xì)胞死亡蛋白5（PDCD5）在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平的表達(dá)及其相關(guān)性，探討PDCD5與食管鱗癌病理特征的關(guān)系；3）研究食管鱗癌不同組織部位中TMEM166、PDCD5、Tip60、MDM2mRNA與p53蛋白的表達(dá)，探

2、討TMEM166、PDCD5、Tip60、MDM2mRNA與p53蛋白與食管鱗癌病理特征的相關(guān)性及其在食管鱗癌不同部位組織中的交互作用。
　　 方法：1）標(biāo)本收集：選用新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院2008年5月～2009年4月手術(shù)切除的85例術(shù)前未進(jìn)行抗腫瘤治療的食管鱗狀細(xì)胞癌新鮮手術(shù)標(biāo)本，分別留取癌組織、癌旁組織、遠(yuǎn)癌組織標(biāo)本；2）按照性別、民族、年齡、臨床分期匹配（2009年第七版UICC國際食管癌分期），選擇I期、II期、II

3、I期各12例共36例食管鱗癌、遠(yuǎn)癌組織手術(shù)標(biāo)本，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)、RT-PCR、免疫組化的方法，分別對食管鱗癌組織、遠(yuǎn)癌組織細(xì)胞的早期凋亡率、TMEM166mRNA、TMEM166蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測；RT-PCR、Western-blot檢測食管鱗癌組織不同部位PDCD5mRNA、PDCD5蛋白的表達(dá)，分析PDCD5mRNA、PDCD5蛋白的相關(guān)性及與食管鱗癌的病理特征的關(guān)系；3）85例食管鱗癌及遠(yuǎn)癌組織RT-PCR檢測TMEM166、PD

4、CD5、Tip60、MDM2mRNA表達(dá)，免疫組化檢測p53蛋白表達(dá)，分析上述基因表達(dá)與食管鱗癌的病理學(xué)特點(diǎn)及上述基因間的交互作用；4）統(tǒng)計學(xué)方法：用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，均數(shù)比較采用方差分析（ANOVA）、SNK檢驗（Student-Newman-Keuls）、χ2檢驗、Pearson積差相關(guān)分析；分類資料采用t檢驗、R×C列聯(lián)表確切概率法、Spearman等級相關(guān)分析。檢驗水準(zhǔn)α=0.05

5、。
　　 結(jié)果：1）食管鱗癌組織TMEM166 mRNA表達(dá)（1.1214±0.2262）低于遠(yuǎn)癌組織（1.4645±0.3396）（P=0.014）；TMEM166基因表達(dá)隨病變分期增加呈下降趨勢（rs=-0.357，P=0.033）；2）食管鱗癌組織細(xì)胞早期凋亡率（2.1563±0.4740）高于遠(yuǎn)癌組織（1.6313±0.3121）（P＜0.001），食管鱗癌組織細(xì)胞早期凋亡率與食管鱗癌臨床分期負(fù)相關(guān)（rs=-0.584，

6、P＜0.001），與TMEM166基因表達(dá)正相關(guān)（r=0.310，P=0.036）；3）與遠(yuǎn)癌組織相比，食管鱗癌組織中TMEM166蛋白亞細(xì)胞定位發(fā)生改變；4）食管鱗癌組織中PDCD5蛋白表達(dá)（0.4387±0.1632）低于遠(yuǎn)癌組織（0.5659±0.2272），隨臨床分期增加，其表達(dá)量有進(jìn)一步下調(diào)的趨勢（rs=-0.678，P＜0.001；rs=-0.619，P＜0.001）；PDCD5mRNA的表達(dá)與蛋白表達(dá)高度相關(guān)（r=0.71

7、5，0.781）；PDCD5mRNA及蛋白表達(dá)水平與食管鱗癌的腫瘤侵潤深度、淋巴結(jié)分期、分化程度的相關(guān)性不均衡；5）食管鱗癌組織細(xì)胞中，TMEM166mRNA、PDCD5mRNA表達(dá)受抑制，MDM2mRNA、p53在食管鱗癌組織中存在過表達(dá)；6）Tip60在食管鱗癌、遠(yuǎn)癌組織的表達(dá)未發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)差異（0.7359±0.2489 vs 0.7204±0.1512，P=0.012）；7）食管鱗癌腫瘤侵潤深度與PDCD5 mRNA負(fù)相關(guān)（rs=

8、-0.220，P=0.043），與p53蛋白、Tip60mRNA正相關(guān)（rs=0.443，0.523；P＜0.001）。淋巴結(jié)分期與TMEM166、PDCD5 mRNA負(fù)相關(guān)（rs=-0.593，-0.416；P=0.008，0.013）；與Tip60、MDM2 mRNA正相關(guān)（rs=0.273，0.182；P=0.038，0.009）。腫瘤細(xì)胞G分級與TMEM166mRNA負(fù)相關(guān)（rs=-0.423，P=0.029）；與MDM2 mR

9、NA、P53蛋白正相關(guān)（rs=0.442，0.299；P=0.027，0.045）；8）食管鱗癌組織中TMEM166 mRNA與PDCD5 mRNA正相關(guān)（rs=0.516，P＜0.001），與Tip60 mRNA、MDM2 mRNA、p53蛋白負(fù)相關(guān)（rs=-0.236，-0.453，-0.426；P=0.015，＜0.001，＜0.001）；PDCD5 mRNA與Tip60、MDM2 mRNA及p53蛋白負(fù)相關(guān)（rs=-0.417，

10、-0.631，-0.589；P＜0.001）；Tip60 mRNA與MDM2 mRNA、p53蛋白正相關(guān)（rs=0.388，0.321；P＜0.001，0.001）；MDM2 mRNA與p53蛋白正相關(guān)（rs=0.440，P＜0.001）；9）食管鱗癌遠(yuǎn)癌組織中TMEM166 mRNA與PDCD5 mRNA正相關(guān)（rs=0.305，P=0.002）；PDCD5 mRNA與MDM2 mRNA、p53蛋白負(fù)相關(guān)（rs=-0.315，-0.2

11、10；P=0.001，0.031）；MDM2 mRNA與p53蛋白正相關(guān)（rs=0.221，P=0.023）。
　　 結(jié)論：1）食管鱗癌組織細(xì)胞早期凋亡率增高，TMEM166 mRNA在食管鱗癌的表達(dá)受抑制；TMEM166蛋白定位的改變可能導(dǎo)致TMEMmRNA表達(dá)量的下降和該基因功能的變化；2）PDCD5與食管鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生有關(guān)，PDCD5mRNA的表達(dá)與蛋白表達(dá)高度相關(guān)；3）食管鱗癌組織細(xì)胞中，TMEM166、PDCD5mR