小鼠膀胱癌紅色熒光移植瘤模型的建立及其熒光影像分析.pdf

1、研究背景：分子影像學(xué)是利用體外成像檢測(cè)器在細(xì)胞和分子層次上對(duì)活體動(dòng)物、模型系統(tǒng)和人體的生物學(xué)過(guò)程進(jìn)行定性和定量研究的學(xué)科[1-2]。近幾年分子成像技術(shù)發(fā)展很快，使得對(duì)小動(dòng)物腫瘤模型實(shí)時(shí)、非侵入在體成像已成為可能[3]。其中活體體內(nèi)光學(xué)成像與傳統(tǒng)的檢測(cè)方法相比具有巨大的優(yōu)越性，堪稱是分子基因檢測(cè)領(lǐng)域的技術(shù)革命[4]，它將熒光蛋白引入靶細(xì)胞或者小動(dòng)物體內(nèi)，通過(guò)活體熒光成像系統(tǒng)在體的、非侵入的、動(dòng)態(tài)地觀察生物過(guò)程，這一技術(shù)對(duì)腫瘤微小轉(zhuǎn)移灶的檢

2、測(cè)靈敏度極高，不涉及放射性物質(zhì)，非常安全[5-7]，目前已廣泛應(yīng)用于腫瘤研究。用紅色熒光蛋白(DsRed)作為報(bào)告基因，采用脂質(zhì)體2000介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染法，將DsRed標(biāo)記小鼠膀胱癌(BTT739)細(xì)胞，建立鼠膀胱癌皮下移植瘤模型，通過(guò)MAESTRO活體成像系統(tǒng)在體、非侵入、動(dòng)態(tài)地研究膀胱腫瘤的生物學(xué)過(guò)程是本實(shí)驗(yàn)的目的。
　　 目的：探討紅色熒光蛋白(DsRed)標(biāo)記的小鼠膀胱癌生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移的分子熒光影像學(xué)特征。
　　 方法

3、：采用脂質(zhì)體2000介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染法，將chickenβ-actin-DsRed-Neo載體轉(zhuǎn)染到小鼠膀胱癌BTT739細(xì)胞株；G418篩選后獲得穩(wěn)定表達(dá)DsRed的單克隆細(xì)胞(BTT739-DsRed)；615小鼠24只隨機(jī)分為三組，后肢皮下注射細(xì)胞懸液，第1、2組注射BTT739-DsRed細(xì)胞，第3組注射BTT739細(xì)胞，建立移植瘤模型；MAESTRO活體成像儀設(shè)定激發(fā)光波長(zhǎng)560～580nm，發(fā)射光波長(zhǎng)590～610nm，曝光時(shí)

4、間5000ms連續(xù)觀察4周，第2組每周處死小鼠并剖開(kāi)成像，記錄腫瘤生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移的熒光影像，測(cè)定腫瘤大小及熒光信號(hào)值；統(tǒng)計(jì)分析腫瘤大小與熒光信號(hào)值，全身成像與剖開(kāi)成像之間的關(guān)系。
　　 結(jié)果：1.成功建立小鼠膀胱癌紅色熒光移植瘤模型。
　　 2.MAESTRO活體成像儀下激發(fā)光波長(zhǎng)560～580nm，發(fā)射波長(zhǎng)590～610nm,曝光時(shí)間5000ms連續(xù)觀察四周，第1周觀測(cè)到發(fā)紅色熒光的腫瘤，第4周觀測(cè)到局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，未見(jiàn)遠(yuǎn)處

5、轉(zhuǎn)移。
　　 3.第1組連續(xù)4周測(cè)定腫瘤熒光信號(hào)值依次為：88.85±17.65、122.26±54.63、133.12±69.06、714.58±342.88counts；腫瘤大小依次為：12.78±4.14、45.07±21.71、82.55±28.98、253.01±67.27mm2；第2組全身成像腫瘤大小4周依次為：11.63±3.27、50.07±23.41、89.76±29.12、289.64±73.56mm2，剖開(kāi)

6、成像依次：12.24±4.53、72.08±30.12、141.09±43.26、523.89±236.78 mm2
　　 4.統(tǒng)計(jì)分析腫瘤大小與熒光信號(hào)強(qiáng)度呈線性正相關(guān)(r=0.74，t=3.97，P＜0.05)，全身成像與剖開(kāi)成像腫瘤大小呈線性正相關(guān)(r=0.97，t=10.00，P＜0.05)，全身成像測(cè)得的腫瘤大小為剖開(kāi)后成像的70.85±17.13％。
　　 結(jié)論：小鼠膀胱癌紅色熒光移植瘤模型可以直觀、連續(xù)、敏