烏司他丁對(duì)急性肝功能衰竭大鼠肝組織中CD163-HO-1變化的影響.pdf

1、目的： 急性肝功能衰竭(acute liver failure，ALF)是一種嚴(yán)重的臨床綜合征，常導(dǎo)致大量的肝細(xì)胞壞死，病死率非常高，其發(fā)病機(jī)制和治療措施一直是研究的焦點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)探討烏司他丁對(duì)急性肝功能衰竭的保護(hù)作用及對(duì)CD163和血紅素加氧酶-1(hemeoxygenase-1，HO-1)的影響。 方法： 通過腹腔聯(lián)合注射D-氨基半乳糖(D-Gal)和脂多糖(LPS)，建立急性肝功能衰竭大鼠模型。186只SD雄

2、性健康大鼠，隨機(jī)分為3組：Ⅰ組為對(duì)照組(6只)，腹腔注射0.9％NaCl2ml；Ⅱ組為模型組(75只)，腹腔聯(lián)合注射800mg/kg D-Gal和40μg/kg LPS，30min后腹腔注射0.9％NaCl0.4ml；Ⅲ組為烏司他丁干預(yù)組(75只)，造模后30min腹腔注射100，000U/kg烏司他丁。另外，Ⅱ、Ⅲ組均留15只大鼠觀察生存率。造模后分別于6、12、24、36和48h，各組隨機(jī)取6只大鼠，動(dòng)態(tài)觀察肝組織病理形態(tài)，監(jiān)測肝生

3、化指標(biāo)含量，免疫組織化學(xué)方法檢測肝組織CD163蛋白和HO-1蛋白的表達(dá)，逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測肝組織CD163 mRNA和HO-1 mRNA的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±S)表示，采用SPSS13.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1、模型建立24h后，大鼠表現(xiàn)為極度虛弱，活動(dòng)明顯減少，食欲減退，精神萎靡、嗜睡、少數(shù)發(fā)生抽搐。血膽紅素明顯升高，轉(zhuǎn)氨酶亦明顯升高。肝病

4、理學(xué)表現(xiàn)為肝組織結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重，出現(xiàn)彌漫性的大片壞死，細(xì)胞溶解，肝索解離，小葉結(jié)構(gòu)紊亂，肝竇明顯擴(kuò)張并出血，小葉內(nèi)及匯管區(qū)可見大量炎癥反應(yīng)細(xì)胞浸潤，提示急性肝功能衰竭動(dòng)物模型成功建立； 2、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組大鼠生存率分別為100％(6/6)、40％(6/15)、66.7％(10/15)，Ⅲ組生存率較Ⅰ、Ⅱ組明顯提高(P<0.05)。生存曲線分析亦見模型組生存率比干預(yù)組低。 3、各組大鼠肝功能檢查示，造模后6h，血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)

5、移酶(alanine aminotransferase，ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase，AST)以及總膽紅素(total bilirubin，TBil)濃度均顯著升高，以12～24h之間最為顯著。模型組與干預(yù)組 ALT、AST于24h達(dá)峰，分別為8346.7±1363.1U/L，9766.7±1274.1U/L與4151.3±970.0U/L，4696.7±1476.9U/L，均較對(duì)

6、照組24.0±2.0U/L，82.3±16.9U/L高(F值分別為55.684，55.501，均P<0.01)，但干預(yù)組顯著低于模型組(P<0.01)；而TBil于36h達(dá)峰，模型組與干預(yù)組分別為93.0±8.9μmol/L和66.0±10.5μmol/L，較對(duì)照組5.3±0.6μmol/L高(F值為95.319，P<0.01)，干預(yù)組亦顯著低于模型組(P<0.01)。 4、免疫組織化學(xué)結(jié)果表明，相鄰切片CD163和HO-1的陽

7、性表達(dá)部位大體一致，多位于肝竇內(nèi)及匯管區(qū)，CD163只表達(dá)在巨噬細(xì)胞胞漿內(nèi)，而HO-1除此之外，造模后在部分肝細(xì)胞胞漿中也有表達(dá)。與對(duì)照組相比，模型組CD163蛋白和HO-1蛋白表達(dá)增加(P<0.01)，而烏司他丁干預(yù)組上升更加明顯(P<0.01)； 5、逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)結(jié)果顯示，對(duì)照組CD163 mRNA、HO-1 mRNA僅有少量表達(dá)，模型組6h已有升高(P<0.01)，至24h達(dá)高峰，隨后逐漸下降，但與

8、對(duì)照組比較，各時(shí)間點(diǎn)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；干預(yù)組各時(shí)間點(diǎn)較模型組均增加，在36h達(dá)高峰(P<0.01)，隨后下降； 6、CD163 mRNA與HO-1 mRNA變化趨勢相同，用直線相關(guān)分析證明兩者有顯著的正相關(guān)性(r=0.830，P<0.01)。 結(jié)論： 1、腹腔聯(lián)合注射800mg/kg體質(zhì)量D-Gal和40μg/kg體質(zhì)量LPS可以一次性成功建造急性肝功能衰竭大鼠模型，大鼠狀態(tài)、死亡率、肝組織病理