二氧化碳?xì)怏w對離體子宮內(nèi)膜細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、子宮內(nèi)膜異位癥(Endometriosis,EMs)是一種婦科常見病,在育齡婦女中的發(fā)病率高達(dá)10﹪-15﹪.病因至今尚未明確,其中兩個重要發(fā)病機(jī)制為:EMs患者在位內(nèi)膜的凋亡下調(diào),增殖上調(diào),凋亡及增殖平衡被打破;以及EMs患者腹腔局部缺乏足夠的免疫監(jiān)視.腹腔鏡手術(shù)是EMs診斷的金標(biāo)準(zhǔn),能早期發(fā)現(xiàn)并更徹底地清除異位子宮內(nèi)膜的微小病灶,因此成為EMs患者的首選手術(shù)方式. 腹腔鏡手術(shù)因其創(chuàng)傷小,術(shù)后疼痛輕微,住院時間短,恢復(fù)快及其獨特的美容

2、效果等優(yōu)點倍受患者們青睞.隨著腹腔鏡手術(shù)應(yīng)用的日益推廣及提高,惡性腫瘤也可選擇性地進(jìn)行腹腔鏡下切除.但自1978年首次報道了惡性腫瘤腹腔鏡檢查術(shù)后發(fā)生切口轉(zhuǎn)移的病例以來,該問題逐漸引起學(xué)者們的重視.多項研究發(fā)現(xiàn),腹腔鏡手術(shù)中最常使用的二氧化碳(CO<,2>)氣腹技術(shù)對胃腸道某些腫瘤細(xì)胞有促進(jìn)增殖,抑制凋亡作用,且增強了某些腫瘤細(xì)胞的侵襲性,從而促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移.這可能與CO<,2>氣腹引起的腹腔局部壓力升高,機(jī)體酸堿代謝紊亂、局部腹

3、膜結(jié)構(gòu)改變,尤其是對腹腔局部免疫的顯著抑制等效應(yīng)有關(guān). 由于腹腔鏡在診斷和治療EMs中獨特的優(yōu)越性,目前其在臨床應(yīng)用廣泛.而盡管EMs是一種良性病變,但異位子宮內(nèi)膜病灶卻表現(xiàn)出異常的種植、侵襲、甚至轉(zhuǎn)移等類似惡性腫瘤的生物學(xué)行為.這就使我們聯(lián)想到EMs術(shù)后難免殘留的異位內(nèi)膜細(xì)胞是否與部分胃腸道腫瘤細(xì)胞一樣,受到CO<,2>氣腹刺激而出現(xiàn)生長活躍現(xiàn)象呢.本課題結(jié)合當(dāng)前對CO<,2>氣腹術(shù)的最新認(rèn)識與EMs臨床表型的特點,通過原代培

4、養(yǎng)異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞建立EMs體外模型,并基于EMs最新觀點"在位內(nèi)膜決定論",同時觀察CO<,2>氣體對異位及在位子宮內(nèi)膜細(xì)胞增殖的影響,旨在探索CO<,2>氣腹是否具有促進(jìn)EMs灶增殖效應(yīng),從而參與EMs復(fù)發(fā). 材料和方法: 選擇本院經(jīng)病理明確診斷的卵巢型子宮內(nèi)膜異位癥患者(n=10),術(shù)后取其卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫壁,進(jìn)行原代培養(yǎng);及病理明確診斷的進(jìn)行子宮切除手術(shù)的子宮內(nèi)膜異位癥患者(n=19)、子宮肌瘤患者(n=12

5、),取其在位子宮內(nèi)膜,進(jìn)行原代培養(yǎng).用二步法免疫組織化學(xué)鑒定所培養(yǎng)細(xì)胞.對體外培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜細(xì)胞進(jìn)行模擬腹腔鏡術(shù)中CO<,2>氣腹環(huán)境,用99.99﹪CO<,2>維持壓力15mmHg,處理90min.并設(shè)置對照組,與CO<,2>組同時放置于同一個培養(yǎng)箱內(nèi)90min,一個大氣壓下,恒溫37℃,5﹪的CO<,2>環(huán)境.處理后分別在24h、48h兩個時間點用流式細(xì)胞技術(shù)監(jiān)測其細(xì)胞周期分布,因異位內(nèi)膜細(xì)胞數(shù)量有限只取48h這個時間點進(jìn)行檢測.且

6、在處理后立即測得其培養(yǎng)基內(nèi)pH值,并間隔lOmin監(jiān)測pH值,直至pH值恢復(fù)至7.0左右. 數(shù)據(jù)由均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x±S)來表示,用X<'2>檢驗的統(tǒng)計學(xué)方法進(jìn)行組間數(shù)據(jù)比較分析,檢驗水準(zhǔn)α=0.05,雙側(cè).所有實驗數(shù)據(jù)用SPSS11.0統(tǒng)計軟件包進(jìn)行處理. 結(jié)果: 1.體外培養(yǎng)的對應(yīng)月經(jīng)增生期異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞予以模擬CO<,2>氣腹后48h,相比對照組G<,0>-G<,1>期細(xì)胞數(shù)有減少趨勢,S期、G<,2>-M

7、期細(xì)胞數(shù)有增多趨勢.體外培養(yǎng)的對應(yīng)月經(jīng)分泌期異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞予以模擬CO<,2>氣腹后48h,相比對照組G<,0>-G<,1>期細(xì)胞數(shù)有增多趨勢, S期、G<,2>-M期細(xì)胞數(shù)有減少趨勢,但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0>05). 2.EMs在位子宮內(nèi)膜細(xì)胞及非EMs子宮內(nèi)膜細(xì)胞予以模擬CO<,2>氣腹后 24h 及48h兩時間點,相比對照組細(xì)胞周期分布無顯著變化(p>0.05). 3.EMs在位子宮內(nèi)膜細(xì)胞原代培養(yǎng)24h,

8、48h時G<,0>-G<,1>期細(xì)胞少于相應(yīng)非EMs子宮內(nèi)膜細(xì)胞,S期及G<,2>-M期細(xì)胞多于相應(yīng)的非EMs子宮內(nèi)膜細(xì)胞.但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05).4.模擬CO<,2>氣腹處理后培養(yǎng)基pH降低至6.2左右,并于2h內(nèi)恢復(fù)至7.0左右.5.異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞原代培養(yǎng)成功率為63.0﹪(29/43),在位子宮內(nèi)膜細(xì)胞的原代培養(yǎng)成功率高達(dá)96.9﹪(31/32).兩者比較有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05). 結(jié)論:1.模擬CO<

9、,2>氣腹對體外培養(yǎng)的異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞的增殖狀況短期內(nèi)無顯著影響,但存在促進(jìn)月經(jīng)增生期異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞增殖的趨勢,及抑制月經(jīng)分泌期異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞增殖的趨勢.2.模擬CO<,2>氣腹對體外培養(yǎng)的EMs在位子宮內(nèi)膜細(xì)胞及非EMs子宮內(nèi)膜細(xì)胞的增殖狀況短期內(nèi)無顯著影響.但流式結(jié)果提示體外培養(yǎng)的EMs在位子宮內(nèi)膜細(xì)胞的增殖能力強于非EMs子宮內(nèi)膜細(xì)胞.3.CO<,2>氣腹在短時間內(nèi)降低了子宮內(nèi)膜細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境的pH值.4.異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞原代培