青海蠶豆、豌豆病毒病調(diào)查和菜豆黃花葉病毒（BYMV）全系列分析.pdf

1、青海省是我國(guó)蠶豆和豌豆主要產(chǎn)地。病毒病是該地蠶豆和豌豆上的重要病害。2005年和2006年，中國(guó)和澳大利亞兩國(guó)科研人員在青海的7個(gè)市縣進(jìn)行了蠶豆和豌豆病毒病田間調(diào)查，同時(shí)對(duì)所采樣本進(jìn)行了組織印跡免疫法(Tissue blot immLlrloassav，TBIA)檢測(cè)，共檢測(cè)到3種病毒，其中菜豆黃花葉病毒(Bean yellow mosaic virus BYMV)是最主要的病原。 本研究以BYMV的7個(gè)中國(guó)青海蠶豆分離物和1個(gè)

2、豌豆分離物侵染的葉片總RNA為模板，利用BYMV登錄的序列設(shè)計(jì)了一對(duì)特異性引物，RT-PCR擴(kuò)增獲得了長(zhǎng)度為1071bp的目標(biāo)片段。對(duì)目的片段進(jìn)行了純化回收、連接、轉(zhuǎn)化、篩選并測(cè)序。序列分析顯示此片段中包含822bp的CP序列，編碼273個(gè)氨基酸。8個(gè)分離物的CP基因核苷酸和推導(dǎo)編碼蛋白質(zhì)的氨基酸序列的同源性分別為99.0％～99.9％和99.35％～100.0％。與18個(gè)BYMV外殼蛋白進(jìn)行序列同源性和系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析的結(jié)果表明，8個(gè)分

3、離物的核苷酸和氨基酸的同源性分別為83.69％～99.9％和90.1％～100％。BYMV中國(guó)青海蠶豆分離物與中國(guó)云南蠶豆分離物同源性最高；卵的序列特征揭示，在BYMV中病毒的蚜傳相關(guān)基序?yàn)镹AG。 通過(guò)6次RT-PCR得到了BYMV青海分離物(9-16)基因組的全序列，這是國(guó)內(nèi)關(guān)于此病毒基因組全序列的首次報(bào)道。序列分析結(jié)果表明：9-16全序列共9547個(gè)核苷酸，5'-和3'-非翻譯區(qū)序列分別為205和174個(gè)核苷酸，中間為91

4、68個(gè)核苷酸的開(kāi)放讀框，編碼一個(gè)長(zhǎng)為3056個(gè)氨基酸、分子量約為352.6 kD的多聚蛋白。此病毒基因組及其所編碼的多聚蛋白的大小與其它馬鈴薯Y病毒屬病毒較為相近。多聚蛋白含有9個(gè)可能的蛋白酶切位點(diǎn)，切割后產(chǎn)生的成熟蛋白產(chǎn)物中具有保守的氨基酸基序，這與其它potyviruses都非常相似。在10個(gè)蛋白產(chǎn)物中，3'-NTR、NIb和CP相對(duì)保守，而5' -NTR、Pl和P3變異最大。 將BYMV用摩擦接種的方法分別接種蠶豆和豌豆幼