不同濃度尿酸鹽對3T3-L1及INS-1細胞炎癥及氧化應(yīng)激的影響.pdf

1、本研究分為二部分：
　　 第一部分、不同濃度尿酸鹽對3T3-L1細胞炎癥及氧化應(yīng)激的影響
　　 目的：不同濃度尿酸鹽刺激下觀察成熟脂肪細胞炎癥及氧化應(yīng)激指標變化，探討高尿酸對成熟脂肪細胞損傷的機制。
　　 方法：誘導分化3T3-L1前體脂肪細胞為成熟脂肪細胞，油紅O染色鑒定，細胞計數(shù)鋪板。根據(jù)人體尿酸分布規(guī)律設(shè)空白對照組及尿酸鹽低劑量組（5mg/dL、7mg/dL、9mg/dL），中劑量組(12mg/dL、15m

2、g/dL、18mg/dL)，高劑量組(2lmg/dL，24mg/dL，27mg/dL)，各組分別應(yīng)用不同濃度尿酸鹽干預(yù)24h，取上清離心后進行雙夾心酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測白細胞介素-1β(IL-1β)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)的水平，剩余細胞做MTT測細胞吸光度。
　　 結(jié)果：①當尿酸鹽濃度為5mg/dL及7mg/dL時，SOD較對照組明顯的上升，當尿酸鹽濃度達到15mg/dL時

3、，SOD水平低于對照組，而MDA明顯高于對照組(P<0.05)。②當尿酸鹽在9mg/dL至18mg/dL時，IL-1β較對照組明顯升高(P<0.05)；當尿酸鹽達到2lmg/dL時，TNF-α較對照組明顯下降(P<0.05)；③當尿酸鹽濃度達到2lmg/dL時，細胞的吸光度明顯下降，當濃度達到27mg/dL時，細胞的吸光度達到最低(P<0.05)。
　　 結(jié)論：體外5mg/dL及7mg/dL尿酸鹽可通過上調(diào)脂肪細胞內(nèi)SOD的水平

4、抵抗脂質(zhì)過氧化，但當尿酸鹽濃度達到15mg/dL時MDA生成增加及SOD水平下降造成細胞損傷。
　　 第二部分、不同尿酸尿酸鹽對INS-1細胞炎癥及氧化應(yīng)激的影響
　　 目的：不同濃度尿酸鹽刺激下觀察INS-1炎癥及氧化應(yīng)激指標變化，探討高尿酸對胰島β細胞損傷的機制。
　　 方法：培養(yǎng)INS-1細胞，根據(jù)人體尿酸分布規(guī)律設(shè)空白對照組及尿酸鹽低劑量組(5mg/dL、7mg/dL)，中劑量組(9mg/dL)，高劑量組

5、(12mg/dL、15mg/dL)，各組分別應(yīng)用不同濃度尿酸鹽干預(yù)24h留取上清液，留取上清液利用雙夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)檢測白細胞介素-1β(IL-1β)、腫瘤壞死因子(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)，INS-1細胞繼續(xù)應(yīng)用無糖KRHB溶液孵育30min后，分別采用含糖2.8及16.7mmol/L KRHB溶液孵育1h，分別留取上清液，利用ELISA法檢測基礎(chǔ)胰島素及高糖刺激后胰島素水平，剩余細胞

6、做噻唑藍(MTT)檢測INS-1細胞吸光度。
　　 結(jié)果：①當尿酸鹽濃度為5mg/dL時，細胞內(nèi)SOD水平較對照組明顯升高(P<0.05)；當尿酸鹽濃度在9mg/dL及12 mg/dL時，MDA較對照組明顯升高，與此同時當尿酸鹽濃度達到9mg/dL～15mg/dL時，SOD水平顯著下降(P<0.05)；②當尿酸鹽濃度達到9mg/dL及12mg/dL時IL-1β及TNF-α較對照組明顯升高(P<0.05)；③當尿酸鹽濃度達到12m