GHRP-2對(duì)豬GH分泌的作用規(guī)律及促生長效果研究.pdf

1、本研究通過系列實(shí)驗(yàn)，用GHRP-2處理豬垂體腺細(xì)胞和生長豬，揭示GHRP-2促進(jìn)垂體腺細(xì)胞分泌GH的作用特點(diǎn)、GHRP-2向GHRH、ss對(duì)垂體腺細(xì)胞作用的關(guān)系；探索GHRP-2促GH分泌可能的信號(hào)途徑，以揭示GHRP-2促生長的規(guī)律及可能機(jī)制；研究GHRP-2對(duì)豬生產(chǎn)性能、氮代謝、血液中GH濃度的影響，以探索GHRP-2對(duì)豬生產(chǎn)的應(yīng)用前景，為GHRPS在生產(chǎn)實(shí)踐中的開發(fā)和利用提供理論依據(jù)。 實(shí)驗(yàn)一：GHRP-2對(duì)豬腺垂體細(xì)胞分

2、泌GH規(guī)律的影響研究。共進(jìn)行三個(gè)實(shí)驗(yàn)，分離1～3日齡新生仔豬腺垂體細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)形成單層后，①分別用0、10<'-12>、10<'-11>、10<'-10>、10<'-9>、10<'-8>、10<'-7>、10<'-6>、10<'-5>Mol濃度的GHRP-2處理垂體細(xì)胞2h；②用10<'-6>Mol濃度的GHRP-2處理垂體細(xì)胞5min至180min；③用10<'-6>Mol GHRP-2連續(xù)依次處理垂體細(xì)胞6次，每次1h。處理結(jié)束后

3、，收集培養(yǎng)基，測(cè)定GH濃度。結(jié)果表明：①10<'-12>～10<'-5>Mol濃度的GHRP-2都能作用于體外培養(yǎng)的垂體細(xì)胞，刺激垂體細(xì)胞分泌GH(P<0.01)，10<'-12>～10<'-8>Mol濃度之間差異不顯著(P>0.05)，10<'-7>～10<'-5>組極顯著高于10<'-12>～10<'-8>Mol(P<0.01)，GHRP一2適宜濃度為10<'-6>Mol；@GHRP-2能引起GH的快速分泌，在5min就可使GH的分

4、泌達(dá)到最大，并與以后時(shí)間的處理效應(yīng)無差異；③在連續(xù)處理的前三次，GHRP-2能促進(jìn)GH的分泌，從第四次開始，GH的分泌出現(xiàn)抑制狀態(tài)，并隨著處理次數(shù)的增加抑制狀態(tài)更強(qiáng)。結(jié)論：6HRP-2能夠促進(jìn)垂體細(xì)胞分泌GH,其作用效果與處理劑量、時(shí)間和次數(shù)有關(guān)。 實(shí)驗(yàn)二：GHRP-2對(duì)豬腺垂體細(xì)胞分泌GH機(jī)理的研究。共進(jìn)行三個(gè)實(shí)驗(yàn)。分離1～3日齡新生仔豬腺垂體細(xì)胞，在培養(yǎng)成單層垂體細(xì)胞的培養(yǎng)板中，①分別用GHRP-2、GHRH、SS、GHRP

5、-2+GHRH、SS+GHRP一2、GHRH+SS處理垂體細(xì)胞2h；②GHRP-2、GHRH、PMA,PMA+GHRP-2、GHRP-2+GHRH處理垂體細(xì)胞2h；③將垂體細(xì)胞同10<'-6>M PMA溫育24h耗竭胞內(nèi)的PKC前、后，用GHRP-2、 GHRH、GHRP-2+GHRH處理垂體細(xì)胞2h。處理結(jié)束后，收集培養(yǎng)基，測(cè)定GH濃度。結(jié)果表明：①GHRP-2和GHRH單獨(dú)或聯(lián)合處理豬垂體細(xì)胞能顯著增加GH的分泌(P<0.01)，S

6、S能完全抑制GHRH的促GH分泌的效應(yīng)(P<0.01)， SS不影響GHRP-2的促GH分泌的效應(yīng)，GHRP-2+GHRH具有協(xié)同促GH分泌的作用；②GHRP-2、GHRH、PMA都能刺激腺垂體細(xì)胞分泌GH，其中以GHRP-2的作用最強(qiáng)，GHRH、PMA次之；而GHRP和GHRH與PMA聯(lián)合作用都能極顯著地促進(jìn)GH的分泌(P<0.01)；③GHRH促GH分泌的效應(yīng)不受PMA預(yù)處理的影響，而GHRP-2促GH分泌的效應(yīng)卻因PMA的預(yù)處理使

7、PKC的耗竭而與對(duì)照組相比顯著降低(P<0.01)，GHRP-2和GHRH的聯(lián)合處理效應(yīng)與PMA處理前相比也顯著降低(P<0.01)，但預(yù)處理組GHRP-2+GHRH仍有協(xié)同效應(yīng)存在.結(jié)論：GHRP-2作用于豬的垂體細(xì)胞促GH的機(jī)制與GHRH不同，GHRP與胞內(nèi)PKC信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑相關(guān)。 實(shí)驗(yàn)三：GHRP-2對(duì)生長豬GH分泌模式的影響研究。選擇25kg體重的去勢(shì)公豬，通過外科手術(shù)安裝頸靜脈插管，將8只豬隨機(jī)地分為兩組，每組4只，一

8、組為對(duì)照，一組為處理組，處理組肌肉注射30μg GHRP-2/kgBW,于注射后的0、15、30、45、60、90、120、180min以及6h、9h、12。h通過插管采取5ml血樣，分離血清，用放免法測(cè)定GH含量。結(jié)果表明：處理組在30～9 min.期間血中GH的含量極顯著高于對(duì)照組(p<0.01)，并在60m。in達(dá)到分泌高峰， 120min后回落到對(duì)照組水平。結(jié)論：肌肉注射30μg GHRP-2/kgBW能夠提高外周血液中的GH.

9、濃度，并在30～90min分泌量極顯著大于對(duì)照組，60min達(dá)到峰值。 實(shí)驗(yàn)四：GHRP-2對(duì)生長豬生產(chǎn)性能和氮代謝的影響。選擇體重(33±2)kg的DLY豬20頭，隨機(jī)分成4組，每組5頭，分別以0、3、9、27μg/kgBW的劑量每日肌肉注射GHRP-2，試驗(yàn)期28d。在試驗(yàn)的第三周進(jìn)行4d的代謝試驗(yàn)：在第四周末測(cè)量活體背膘和眼肌厚度。結(jié)果表明：在處理的第一、二周末日增重隨著處理劑量的增加而增加，27μg/kgBW組的日增重和

10、飼料轉(zhuǎn)化效率顯著高于對(duì)照組；連續(xù)處理的第三周出現(xiàn)生長抑制現(xiàn)象，第四周又能恢復(fù)到對(duì)照水平，實(shí)驗(yàn)期的采食量處理與對(duì)照組間無明顯差異。飼料氧在第三周的消化率各組分別為82.92％、81.29％、82.3％.85.15％;代謝率52.59％、51.8％、53.20％、56.67％。GHRP-2處理組有減少背膘和增加眼肌厚度的趨勢(shì)。結(jié)論：生長豬肌肉注射GHRP-2 27μg/kgBW在兩周范圍內(nèi)達(dá)到提高日增重和降低料重比的作用，第三周出現(xiàn)生長抑制