牛蒡相關(guān)微生物對牛蒡生長及品質(zhì)影響的研究.pdf

1、目的：
　　 從分離純化得到的牛蒡根際微生物和內(nèi)生菌中，篩選對牛蒡似rctium lappa L）生長及其品質(zhì)有影響的菌株，并探討牛蒡相關(guān)微生物對牛蒡生長和品質(zhì)的作用；對篩選得到的菌株進行生物學(xué)特性研究、鑒定歸屬。
　　 材料與方法：
　　 對中國11個省市、自治區(qū)30個地區(qū)的牛蒡植物根際土壤，采用涂布平板法分離牛蒡根際和非根際真菌，使用SPSS軟件統(tǒng)計分析真菌類群多樣性與牛蒡品質(zhì)的關(guān)系；挑選形態(tài)不同的11株鐮刀

2、菌，采用水培實驗、發(fā)芽試驗和生防實驗篩選對牛蒡生長有抑制作用和致害作用的菌株，并使用形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)的方法對毒性最強菌株進行鑒定；使用表面消毒法從沈陽白清地區(qū)的牛蒡根、莖、葉、總苞和種子中分離內(nèi)生菌，建立以HPLC定量檢測牛蒡苷和牛蒡苷元的方法，以搖瓶發(fā)酵的方式篩選內(nèi)生菌中有轉(zhuǎn)化牛蒡苷能力的菌株，并采用多相分類法對轉(zhuǎn)化率最高的內(nèi)生菌菌株進行細(xì)菌學(xué)鑒定；通過土培盆栽研究了牛蒡根際微生物和內(nèi)生菌的定殖能力，分別于沈陽白清和大連校園地區(qū)，進

3、行了牛蒡植物原位接種根際微生物和內(nèi)生菌的微區(qū)實驗，以考察菌株對牛蒡（兩年生）的作用。
　　 結(jié)果與結(jié)論：
　　 1.對比牛蒡根際與非根際真菌群落后發(fā)現(xiàn)，根際鐮刀菌數(shù)量是非根際的2.16倍，鐮刀菌在整個真菌區(qū)系中所占的比例由非根際的7.32％提高到根際的13.40％。木霉略有降低，青霉和毛霉變化不大。多樣性指數(shù)H略有升高，但均勻度J略微下降，顯示度D基本不變。
　　 2.水培試驗發(fā)現(xiàn)挑選出的11株鐮刀菌有6株對牛蒡

4、幼苗有致害作用，在發(fā)芽試驗中鐮刀菌F130和F131對牛蒡子發(fā)芽率和胚根長度有顯著抑制作用；對牛蒡幼苗中牛蒡苷含量的影響試驗和根際回接微區(qū)試驗發(fā)現(xiàn)，鐮刀菌F131對牛蒡芽中牛蒡苷的累積有顯著的負(fù)影響；鐮刀菌F131接種48 d后使牛蒡幼苗發(fā)病，鐮刀菌數(shù)可達5.8×104cfu/g，通過生物防治試驗發(fā)現(xiàn)，3512A能夠在牛蒡根際有效定殖并有效抑制鐮刀菌F131，降低發(fā)病率。結(jié)合形態(tài)學(xué)特征和ITS分子生物學(xué)分析，F(xiàn)130和F131均鑒定為F

5、usarium solani。
　　 3.從牛蒡的根、莖、葉、總苞、種子中分離純化了56株內(nèi)生菌。以牛蒡子粉為底物，采用高效液相色譜法定量測定轉(zhuǎn)化培養(yǎng)液中牛蒡苷和牛蒡苷元的含量，篩選得到6株轉(zhuǎn)化牛蒡苷的內(nèi)生菌。其中內(nèi)生細(xì)菌L2的轉(zhuǎn)化率最高，可達76.9％。利用LC-MS等方法對其轉(zhuǎn)化產(chǎn)物牛蒡苷元進行了驗證。L2經(jīng)過形態(tài)觀察、生理生化特征及16SrDNA序列分析，綜合分析鑒定為氧化微桿菌（Microbacterium oxydan