大膠質(zhì)細(xì)胞活化在急性高眼壓視網(wǎng)膜突觸可塑性中的作用.pdf

1、中圖分類號Q!墨窆UDC570博士學(xué)位論文學(xué)校代碼!Q三三密級公玨大膠質(zhì)細(xì)胞活化在急性高眼壓視網(wǎng)膜突觸可塑性中的作用Therolesofreactivemacroglialcellsinretinalsynapticplasticityfollowingacutehighintraocularpressure作者姓名：學(xué)科專業(yè)：研究方向：學(xué)院(系、所)：指導(dǎo)教師：躉lJ指導(dǎo)教師：周利紅生物學(xué)神經(jīng)生物學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院黃菊芳陳旦論文答辯日期竺!

2、：!：蘭答辯委員會主席‘藝垂!型墾≥中南大學(xué)2013年5月大膠質(zhì)細(xì)胞活化在急性高眼壓視網(wǎng)膜突觸可塑性中的作用摘要目的探討急性高眼壓損傷對大鼠視網(wǎng)膜突觸的影響以及大膠質(zhì)細(xì)胞在急性高眼壓損傷后視網(wǎng)膜突觸改變中的調(diào)控作用及其可能的分子機(jī)制。方法大鼠左眼前房穿刺加壓注射無菌生理鹽水至眼內(nèi)壓升高至110mmHg，維持1小時(shí)，制作急性高眼壓動物模型。動物分別存活2小時(shí)，6小時(shí)，12小時(shí)，1天，3天，7天和14天。右眼設(shè)為正常對照組。免疫熒光組織化學(xué)

3、檢測視網(wǎng)膜內(nèi)突觸前終末標(biāo)記物突觸囊泡素(synaptophysin，SYN)與突觸后標(biāo)記物突觸相關(guān)蛋白102(synapseassociatedprotein102，SAP102)的表達(dá)變化。Westernblot檢測視網(wǎng)膜內(nèi)SYN的蛋白改變。用PKCa、rhodopsin、paravalbumin以及calbindin分別標(biāo)記視網(wǎng)膜內(nèi)的雙極細(xì)胞、視桿細(xì)胞、無長突細(xì)胞和水平細(xì)胞，檢測其與SYN的免疫熒光組織化學(xué)雙標(biāo)。RTPCR、west

4、ernblot及免疫熒光組織化學(xué)檢測視網(wǎng)膜內(nèi)大膠質(zhì)細(xì)胞活化的標(biāo)記物GFAP的表達(dá)變化。促突觸發(fā)生因子TSPl／2及其受體a261在健康成年大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)的分布和細(xì)胞定位采用免疫雙標(biāo)法進(jìn)行測定，急性高眼壓損傷后其表達(dá)變化也進(jìn)行了檢測。急性高眼壓動物模型制備成功后，分別給予玻璃體腔注射膠質(zhì)細(xì)胞代謝抑制劑氟代檸檬酸或腹腔注射促突觸發(fā)生因子TSPl／2一a261的拮抗劑gabapentin，觀察視網(wǎng)膜內(nèi)GFAP、SYN以及TSPl／2的表達(dá)變化。

5、結(jié)果1急性高眼壓損傷誘導(dǎo)視網(wǎng)膜內(nèi)SYN表達(dá)呈現(xiàn)明顯的時(shí)空趨勢。急性高眼壓1天內(nèi)，SYN在內(nèi)網(wǎng)層表達(dá)增多，而3天后SYN在外網(wǎng)層分布增寬增粗，7天時(shí)達(dá)到高峰，增寬的SYN延伸到正常情況下無表達(dá)的外核層的內(nèi)側(cè)部分。急性高眼壓后視網(wǎng)膜內(nèi)SAPl02的熒光強(qiáng)度及分布模式均未發(fā)生明顯改變，與SYN的時(shí)空表達(dá)模式無明顯相關(guān)。2急性高眼壓損傷后，視網(wǎng)膜內(nèi)PKCa陽性的雙極細(xì)胞的在內(nèi)網(wǎng)層突起增多，胞體染色增強(qiáng)，與SYN在內(nèi)網(wǎng)層內(nèi)側(cè)明顯雙標(biāo)，而SYN在外