急性高眼壓后大鼠視網(wǎng)膜突觸可塑性及其影響因素的初步探索.pdf

1、第一部分急性高眼壓后大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)突觸標(biāo)記蛋白的表達(dá)變化 目的：通過觀察突觸囊泡素(SYN)、囊泡性谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體1(VGLUT1)和蛋白激酶Cα(PKCα)的表達(dá)變化，初步了解急性眼高壓后大鼠視網(wǎng)膜的突觸可塑性變化。 方法：成年SD大鼠，根據(jù)不同的存活時(shí)間分組。左眼眼壓升高至閃光視網(wǎng)膜電圖b波消失的臨界眼壓，并維持60分鐘，右眼設(shè)為正常對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別存活1、3、7或14天后處死，視網(wǎng)膜冰凍切片行SYN免疫組織化學(xué)和S

2、YN mRNA原位雜交檢測，行SYN與感光細(xì)胞終末標(biāo)記物VGLUT1和雙極細(xì)胞標(biāo)記物PKCa免疫雙標(biāo)檢測。 結(jié)果：急性高眼壓后大鼠視網(wǎng)膜突觸可塑性變化主要表現(xiàn)在：損傷后早期外網(wǎng)層SYN蛋白表達(dá)增高、分布范圍增寬(正常情況下無表達(dá)的視網(wǎng)膜外核層也出現(xiàn)SYN分布)，7天達(dá)到高峰，14天回落。SYN與VGLUT1及PKCa雙標(biāo)檢測顯示，急性高眼壓后VGLUT1與SYN表達(dá)變化模式相同，二者在正常組和各存活時(shí)間點(diǎn)都能雙標(biāo)；而PKCa在損

3、傷后分布范圍無明顯改變。 結(jié)論：急性高眼壓后大鼠視網(wǎng)膜出現(xiàn)突觸可塑性變化，主要表現(xiàn)為損傷后早期視網(wǎng)膜外網(wǎng)層突觸前成分功能性蛋白的表達(dá)上調(diào)和分布范圍增大，但這種變化可能局限于突觸前成分。 第二部分急性高眼壓后大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)突觸的形態(tài)學(xué)改變 目的：采用電子顯微鏡觀察正常及急性高眼壓損傷后不同存活時(shí)間點(diǎn)大鼠視網(wǎng)膜外網(wǎng)層帶狀突觸的形態(tài)和數(shù)目變化及外核層超微結(jié)構(gòu)的改變情況，為急性高眼壓損傷后大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)的突觸可塑性變化提供最

4、直觀的形態(tài)學(xué)依據(jù)。 方法：成年SD大鼠，根據(jù)不同的存活時(shí)間分組。左眼眼壓升高至閃光視網(wǎng)膜電圖b波消失的臨界眼壓，并維持60分鐘，右眼設(shè)為正常對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別存活1、3、7或14天后處死，取視網(wǎng)膜顳下象限，固定、包埋、超薄切片，在常規(guī)電子顯微鏡下觀察視網(wǎng)膜外網(wǎng)層帶狀突觸和外核層結(jié)構(gòu)的形態(tài)學(xué)變化。 結(jié)果：電子顯微鏡下正常視網(wǎng)膜外網(wǎng)層可見大量帶狀突觸結(jié)構(gòu)：在突觸前成分靠近突觸前膜附近可見長為數(shù)十到幾百納米的基本與突觸前膜垂

5、直電子致密帶，圍繞帶分布的突觸囊泡排列整齊、致密，突觸前、后膜增厚，突觸前、后膜之間可見較為清晰的突觸間隙。急性高眼壓后視網(wǎng)膜外網(wǎng)層帶狀突觸的形態(tài)和數(shù)目基本正常。電子顯微鏡下正常視網(wǎng)膜外核層由緊密排列的感光細(xì)胞細(xì)胞核構(gòu)成，無軸突終末和突觸結(jié)構(gòu)分布。急性高眼壓后3天和7天，視網(wǎng)膜外核層可見包含囊泡的軸突終末樣結(jié)構(gòu)，但未發(fā)現(xiàn)典型突觸結(jié)構(gòu)。 結(jié)論：急性高眼壓后電子顯微鏡下觀察到的視網(wǎng)膜外核層異位分布的包含囊泡的軸突終末樣結(jié)構(gòu)可能是視網(wǎng)

6、膜外網(wǎng)層突觸前功能性蛋白的分布范圍增寬的形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)。 第三部分急性高眼壓后大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)突觸可塑性影響因素的初步探索 目的：從腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)和膽固醇兩個(gè)方面入手，初步探索急性高眼壓后大鼠視網(wǎng)膜突觸可塑性的影響因素。 方法：成年SD大鼠，根據(jù)不同的干預(yù)因素(左眼溶媒預(yù)處理、BDNF預(yù)處理和BDNF抗體預(yù)處理)和不同存活時(shí)間分組。預(yù)處理后2天，左眼眼壓升高至閃光視網(wǎng)膜電圖b波消失的臨界眼壓，并維持60分

7、鐘，右眼設(shè)為正常對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別存活1、3、7或14天后處死。不同組別視網(wǎng)膜冰凍切片行SYN免疫組化、GFAP免疫組化或FilipinⅢ染色檢測。 結(jié)果：BDNF預(yù)處理后，在急性高眼壓后早期，SYN在視網(wǎng)膜外網(wǎng)層分布范圍增寬的現(xiàn)象延后，至14天，陽性產(chǎn)物分布面積達(dá)到高峰：BDNF抗體預(yù)處理后，SYN陽性產(chǎn)物分布范圍增寬現(xiàn)象前移，在3天時(shí)達(dá)到高峰，但與正常水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，至7天和14天SYN回落；急性高眼壓后Filipi