急性高眼壓后大鼠視網膜突觸可塑性及其影響因素的初步探索.pdf

1、第一部分急性高眼壓后大鼠視網膜內突觸標記蛋白的表達變化 目的：通過觀察突觸囊泡素(SYN)、囊泡性谷氨酸轉運體1(VGLUT1)和蛋白激酶Cα(PKCα)的表達變化，初步了解急性眼高壓后大鼠視網膜的突觸可塑性變化。 方法：成年SD大鼠，根據不同的存活時間分組。左眼眼壓升高至閃光視網膜電圖b波消失的臨界眼壓，并維持60分鐘，右眼設為正常對照組。實驗動物分別存活1、3、7或14天后處死，視網膜冰凍切片行SYN免疫組織化學和S

2、YN mRNA原位雜交檢測，行SYN與感光細胞終末標記物VGLUT1和雙極細胞標記物PKCa免疫雙標檢測。 結果：急性高眼壓后大鼠視網膜突觸可塑性變化主要表現在：損傷后早期外網層SYN蛋白表達增高、分布范圍增寬(正常情況下無表達的視網膜外核層也出現SYN分布)，7天達到高峰，14天回落。SYN與VGLUT1及PKCa雙標檢測顯示，急性高眼壓后VGLUT1與SYN表達變化模式相同，二者在正常組和各存活時間點都能雙標；而PKCa在損

3、傷后分布范圍無明顯改變。 結論：急性高眼壓后大鼠視網膜出現突觸可塑性變化，主要表現為損傷后早期視網膜外網層突觸前成分功能性蛋白的表達上調和分布范圍增大，但這種變化可能局限于突觸前成分。 第二部分急性高眼壓后大鼠視網膜內突觸的形態(tài)學改變 目的：采用電子顯微鏡觀察正常及急性高眼壓損傷后不同存活時間點大鼠視網膜外網層帶狀突觸的形態(tài)和數目變化及外核層超微結構的改變情況，為急性高眼壓損傷后大鼠視網膜內的突觸可塑性變化提供最

4、直觀的形態(tài)學依據。 方法：成年SD大鼠，根據不同的存活時間分組。左眼眼壓升高至閃光視網膜電圖b波消失的臨界眼壓，并維持60分鐘，右眼設為正常對照組。實驗動物分別存活1、3、7或14天后處死，取視網膜顳下象限，固定、包埋、超薄切片，在常規(guī)電子顯微鏡下觀察視網膜外網層帶狀突觸和外核層結構的形態(tài)學變化。 結果：電子顯微鏡下正常視網膜外網層可見大量帶狀突觸結構：在突觸前成分靠近突觸前膜附近可見長為數十到幾百納米的基本與突觸前膜垂

5、直電子致密帶，圍繞帶分布的突觸囊泡排列整齊、致密，突觸前、后膜增厚，突觸前、后膜之間可見較為清晰的突觸間隙。急性高眼壓后視網膜外網層帶狀突觸的形態(tài)和數目基本正常。電子顯微鏡下正常視網膜外核層由緊密排列的感光細胞細胞核構成，無軸突終末和突觸結構分布。急性高眼壓后3天和7天，視網膜外核層可見包含囊泡的軸突終末樣結構，但未發(fā)現典型突觸結構。 結論：急性高眼壓后電子顯微鏡下觀察到的視網膜外核層異位分布的包含囊泡的軸突終末樣結構可能是視網

6、膜外網層突觸前功能性蛋白的分布范圍增寬的形態(tài)學基礎。 第三部分急性高眼壓后大鼠視網膜內突觸可塑性影響因素的初步探索 目的：從腦源性神經營養(yǎng)因子(BDNF)和膽固醇兩個方面入手，初步探索急性高眼壓后大鼠視網膜突觸可塑性的影響因素。 方法：成年SD大鼠，根據不同的干預因素(左眼溶媒預處理、BDNF預處理和BDNF抗體預處理)和不同存活時間分組。預處理后2天，左眼眼壓升高至閃光視網膜電圖b波消失的臨界眼壓，并維持60分

7、鐘，右眼設為正常對照組。實驗動物分別存活1、3、7或14天后處死。不同組別視網膜冰凍切片行SYN免疫組化、GFAP免疫組化或FilipinⅢ染色檢測。 結果：BDNF預處理后，在急性高眼壓后早期，SYN在視網膜外網層分布范圍增寬的現象延后，至14天，陽性產物分布面積達到高峰：BDNF抗體預處理后，SYN陽性產物分布范圍增寬現象前移，在3天時達到高峰，但與正常水平差異無統(tǒng)計學意義，至7天和14天SYN回落；急性高眼壓后Filipi