血管緊張素Ⅳ影響糖尿病大鼠認知功能機制的實驗研究.pdf

1、第一部分 AngⅣ對糖尿病大鼠海馬膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶表達及認知功能的影響
　　 目的：觀察血管緊張素Ⅳ（angiotensinⅣ，AngⅣ）對糖尿病大鼠海馬膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶（acetyltransferanse，ChAT）表達及認知功能的影響。
　　 方法：52只SD雄性大鼠隨機分為正常對照組（C組）10只、糖尿病組（D組）14只，糖尿病+AngⅣ組（E組）14只，糖尿病+AngⅣ+divalillal-AngIV組（F組）1

2、4只，建立STZ糖尿病大鼠模型。成模后第12周，Morris水迷宮測試各組大鼠學習和記憶能力。測試結(jié)束后E組大鼠側(cè)腦室注射AngⅣ5nmol/只/天（1 nmol/uL），F(xiàn)組側(cè)腦室注射AngⅣ5nmol/只/天（1 nmol/uL）+divalinal-AngⅣ5nmol/只/天（1nmol/uL），C組和D組注射等體積的生理鹽水，持續(xù)1周，各組大鼠再進行Morris水迷宮測試。處死大鼠，取材，免疫組化觀察大鼠海馬ChAT蛋白水平的表

3、達，RT-PCR和原位雜交法檢測ChAT mRNA水平的表達。
　　 結(jié)果：Morris水迷宮測試結(jié)果顯示：干預前：與C組相比，D組、E組、F組中心區(qū)域停留時間百分比和通過原平臺次數(shù)明顯減少，逃避潛伏期顯著延長。干預后：與D組相比，E組中心區(qū)域停留時間百分比及通過原平臺次數(shù)明顯增加，逃避潛伏期明顯縮短。與D組相比，F(xiàn)組上述指標無改善。免疫組化結(jié)果顯示：與C組相比，D組海馬ChAT陽性神經(jīng)元平均光密度明顯降低；與D組相比，E組海馬

4、ChAT陽性神經(jīng)元平均光密度明顯增加；與D組相比，F(xiàn)組海馬ChAT陽性神經(jīng)元平均光密度無明顯改變。RT-PCR和原位雜交結(jié)果顯示：與C組比較，D組海馬ChAT mRNA表達水平顯著降低；與D組相比，E組海馬ChATmRNA表達水平明顯增加，同樣，F(xiàn)組與D組比較無明顯差異。
　　 結(jié)論：
　　 1、成模12周后的糖尿病大鼠，學習和記憶功能明顯減退；AngⅣ可以顯著改善糖尿病大鼠的學習和記憶功能。
　　 2、糖尿病大

5、鼠海馬ChAT mRNA和蛋白表達水平明顯下降，AngⅣ可以上調(diào)ChAT mRNA和蛋白表達水平。
　　 3、AngⅣ改善糖尿病大鼠認知功能至少部分與其上調(diào)海馬ChAT表達有關(guān)。
　　 第二部分血管緊張素Ⅳ對糖尿病大鼠海馬神經(jīng)元凋亡及認知功能的影響
　　 目的：觀察血管緊張素Ⅳ（angiotensinⅣ，AngⅣ）對糖尿病大鼠海馬神經(jīng)元凋亡及認知功能的影響。
　　 方法：52只SD雄性大鼠隨機分為正常對照

6、組（C組）10只、糖尿病組（D組）14只，糖尿病+AngⅣ組（E組）14只，糖尿病+AngⅣ+divalinal-AngⅣ組（F組）14只，建立STZ糖尿病大鼠模型。成模后第12周，Morris水迷宮測試各組大鼠學習和記憶能力，測試結(jié)束后E組大鼠側(cè)腦室注射AngⅣ5nmol/只/天（1 nmol/uL），F(xiàn)組側(cè)腦室注射AngⅣ5nmol/只/天（1 nmol/uL）+divalinal-AngⅣ5nmol/只/天（1nmol/uL），C

7、組和D組注射等體積的生理鹽水，持續(xù)1周，各組大鼠再進行Morris水迷宮測試。處死大鼠，取材，免疫組化觀察大鼠海馬凋亡調(diào)節(jié)因子Bcl-x1的表達，同時用原位末端標記法（TUNEL）檢測海馬神經(jīng)元凋亡。
　　 結(jié)果：與C組相比，D組認知功能無明顯改善，海馬Bcl-xl表達水平和神經(jīng)元凋亡無明顯改變；與D組相比，E組大鼠學習和記憶成績明顯改善（P<0.05），海馬Bcl-xl表達明顯增高（P<0.05），海馬神經(jīng)元凋亡明顯減少。