水稻白葉枯病菌廣西分離株中一個(gè)致病相關(guān)基因的鑒定.pdf

1、水稻白葉枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae，簡(jiǎn)稱Xoo)是世界水稻生產(chǎn)中危害嚴(yán)重的兩種細(xì)菌性病害之一，其引發(fā)的水稻白葉枯?。˙acterial leaf blight，簡(jiǎn)稱BLB）對(duì)我國(guó)水稻的產(chǎn)量造成了較大的影響。近幾年來(lái)，水稻白葉枯病菌菲律賓菌株P(guān)XO99A、日本菌株MAFF311018以及韓國(guó)菌株KACC10331都完成了測(cè)序并公布了全基因組序列，這使得研究人員可以更好的研究該病的致病機(jī)理。然而系統(tǒng)的研

2、究Xoo的致病機(jī)理，就需要運(yùn)用功能基因組學(xué)研究的策略構(gòu)建突變體庫(kù)。
　　為了挖掘水稻白葉枯病菌致病相關(guān)基因，本研究采用轉(zhuǎn)座子突變的技術(shù)，將EZ-Tn5轉(zhuǎn)座子通過(guò)電轉(zhuǎn)化的方法轉(zhuǎn)入到水稻白葉枯病菌廣西分離株Xoo K74中，共獲得了10873個(gè)突變體。隨機(jī)挑選了20個(gè)突變體進(jìn)行Southern雜交實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示轉(zhuǎn)座子Tn5隨機(jī)單拷貝插入基因組中。運(yùn)用剪葉法對(duì)600個(gè)突變體進(jìn)行了致病力分析，獲得了12個(gè)致病

3、力明顯降低的突變菌株。通過(guò)定位，同源序列比對(duì)分析后發(fā)現(xiàn)，這些突變基因包括gumD、rfbD、hrpB1、Ⅱ型分泌系統(tǒng)等已知致病相關(guān)基因，其中還獲得了6株脂多糖基因簇相關(guān)基因。
　　脂多糖作為革蘭氏陰性菌細(xì)胞表面的重要組成部分，參與細(xì)胞膜的形成。而wxoC基因作為脂多糖基因簇中的一員，功能尚不明確。本研究獲得的兩株wxoC基因突變菌株M355、sp1，Southern雜交顯示Tn5單拷貝插入。通過(guò)反式功能互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，CM355、C