腸道致病菌的分離與鑒定

1、腸道致病菌的分離與鑒定1、實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康模?）掌握腸道致病菌的分離、鑒定的主要步驟（2）掌握平板劃線分離法（3）掌握玻片凝集試驗的操作方法以及實際意義2、實驗材料實驗材料（1）實驗儀器：試管、玻片、酒精燈、接種針、接種環(huán)、試管架、（2）實驗試劑：生理鹽水、細(xì)菌培養(yǎng)基、傷寒診斷血清、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基（EMB）、克氏雙糖鐵培養(yǎng)基（KIA）、葡萄糖發(fā)酵管、乳糖發(fā)酵管、甘露醇發(fā)酵管、尿素培養(yǎng)基、蛋白胨水、半固體培養(yǎng)基3、實驗流程實驗流程（1）腸

2、道致病菌的分離①待測標(biāo)本的制作：把接種環(huán)放置于點(diǎn)燃的酒精燈火焰處對其進(jìn)行滅菌，用已滅菌的接種環(huán)在細(xì)菌培養(yǎng)基中取少量待測細(xì)菌于盛有5ml生理鹽水的試管中，混勻。②細(xì)菌的分離接種：用接種環(huán)取適量配置好的細(xì)菌懸液，在酒精燈附近進(jìn)行劃線分離法接種細(xì)菌于EMB培養(yǎng)基。將培養(yǎng)基置于37℃培養(yǎng)18~24小時。（2）腸道致病菌的純化①單菌落接種：從已培養(yǎng)待測細(xì)菌的EMB培養(yǎng)基上用已滅菌的接種針挑取某單個菌落接種到KIA培養(yǎng)基上，一部分直接深入培養(yǎng)基中底

3、部，一部分直接涂抹于斜面處，置于37℃培養(yǎng)18~24小時。②待測細(xì)菌的初步判斷：取出已純化培養(yǎng)待測細(xì)菌的KIA培養(yǎng)基，觀察現(xiàn)象，初步斷定該細(xì)菌是致病菌或是非致病菌。中的物質(zhì)并產(chǎn)出硫化氫氣體，由于培養(yǎng)基中含鐵，因而硫化氫能夠與其結(jié)合成硫化鐵，出現(xiàn)黑色現(xiàn)象；而上部因重力含鐵量較少，產(chǎn)生的硫化氫氣體又部分揮發(fā)，只有少部分能夠與少量鐵結(jié)合，故產(chǎn)生的現(xiàn)象不明顯，上部仍呈現(xiàn)紅色。（2）生化鑒定現(xiàn)象與分析：①葡萄糖發(fā)酵管：管內(nèi)培養(yǎng)基指示劑由紫色變成黃

4、色，其內(nèi)可見細(xì)菌有明顯生長現(xiàn)象，無氣泡產(chǎn)生。分析：培養(yǎng)基指示劑由紫色變成黃色，說明該細(xì)菌能夠分解葡萄糖并產(chǎn)酸但不產(chǎn)氣，使得指示劑內(nèi)化學(xué)物質(zhì)發(fā)生顏色改變。②乳糖發(fā)酵管：管內(nèi)培養(yǎng)基指示劑顏色不發(fā)生改變，仍為紫色，有明顯細(xì)菌生長現(xiàn)象，無氣泡產(chǎn)生。分析：培養(yǎng)基指示劑不發(fā)生顏色改變，說明該細(xì)菌能分解乳糖但不能產(chǎn)酸也不產(chǎn)氣，使得管內(nèi)指示劑無明顯現(xiàn)象。③甘露醇發(fā)酵管：管內(nèi)培養(yǎng)基指示劑由紫色變成黃色，其內(nèi)可見細(xì)菌有明顯生長現(xiàn)象，無氣泡產(chǎn)生。分析：培養(yǎng)基