響應曲面法用于救必應等三種藥材高效提取及其提取物的藥理活性研究.pdf

1、近年來，響應曲面法(Response surface methodology，RSM)作為一種重要的統(tǒng)計學試驗設計廣泛應用于生物過程。通過RSM可以建立連續(xù)變量三維曲面模型，對影響生物過程變量及其交互作用進行有效評價，從而確定最佳變量范圍。RSM優(yōu)化生物過程所需試驗組數(shù)相對較少，省時省力，實驗簡單，預測性好，因此該方法已經(jīng)成功應用到多種生物過程的優(yōu)化。此外，RSM亦在中藥有效成分提取研究領域應用廣泛。本論文主要應用響應曲面法深入探討其在

2、中藥五味子，救必應，大黃等三種藥用植物有效成分提取中的應用，確定最佳提取變量，優(yōu)化提取條件。此外，本文對傳統(tǒng)“清熱解毒”中藥——救必應的的抗腫瘤和肝損傷保護作用進行初步研究。論文共分六章。
　　第1章,主要是介紹響應曲面法的理論方法及其在中藥有效成分提取中的應用研究。對深入藥理活性研究的藥用植物救必應的化學成分及藥理活性報道做一綜述。查閱文獻總結(jié)概括了藥用植物五味子中木脂素類成分提取工藝研究、救必應中有效成分的提取工藝研究、大黃中

3、蒽醌類成分的提取工藝研究。
　　第2章,運用響應曲面法（RSM）優(yōu)化加速溶劑萃?。ˋSE）五味子中四種木脂素類成分（五味子素，五味子醇乙，五味子甲素和五味子乙素）。通過RSM建立數(shù)學模型，利用Behnken設計，獲得提取條件的優(yōu)化組合。從數(shù)學模型的三維響應曲面圖和等高線圖，以確定五味子中四種木脂素最佳提取條件如下：提取溶劑為87％的乙醇，提取溫度為160℃，靜態(tài)萃取時間為10分鐘，提取壓力為1500psi，一個提取周期的沖水量為6

4、0％。結(jié)果表明：五味子中四種木脂素的實驗值14.72mg/g，結(jié)果與模型預測值較為一致。
　　第3章,本章中利用建立超聲波輔助提取（UAE）結(jié)合響應曲面法（RSM）提取救必應中紫丁香苷。通過高效液相色譜法（HPLC-UV）對紫丁香苷進行分析和定量。利用Box-Behnkendesign（BBD）設計對提取溶劑、提取溫度和提取時間等三個主要變量進行了優(yōu)化以獲得最高的提取效率。結(jié)果表明：救必應中紫丁香苷的最佳條件為超聲處理頻率40Hz

5、，65％乙醇作為提取溶劑，提取時間30分鐘，提取溫度40℃。在最優(yōu)提取條件下，預測值與實驗值一致。方差分析結(jié)果表明：模型的擬合度高，RSM方法可以用于優(yōu)化救必應中紫丁香苷的提取純化。
　　第4章在本章中，采用響應曲面法優(yōu)化結(jié)合超聲波輔助提?。║EA）大黃中的五種蒽醌類成分（蘆薈大黃素，大黃酸，大黃素，大黃酚和大黃素甲醚）。采用高效液相色譜（HPLC-UV）對五種蒽醌類成分進行分析和定量。利用RSM對影響UEA的三個主要因素參數(shù)（提

6、取溶劑，提取溫度和提取時間）進行了優(yōu)化，以期獲得最高的提取效率。結(jié)果表明：最佳提取條件為84％甲醇作為溶劑，提取時間為33分鐘，提取溫度67℃。這些最佳條件下，實驗值與預測值較為接近。結(jié)果可靠，RSM適用于超聲波提取大黃中的蒽醌類成分。
　　第5章,利用先前獲得就必應提取物進行C57小鼠體內(nèi)抗腫瘤作用的研究，對其抑瘤率，免疫器官指數(shù)及血清學指標進行探討，給藥14天后觀察發(fā)現(xiàn)：各給藥組對小鼠體重基本無影響，救必應高中劑量組可以顯著抑

7、制腫瘤增長，具有顯著的抑瘤率；免疫學指標結(jié)果表明：救必應可以顯著升高胸腺指數(shù)，降低肝指數(shù)，對免疫器官具有一定的保護作用。通過檢測肝臟中ALT和AST含量，進一步明確，救必應提取物可以改善荷瘤小鼠的肝功能，與免疫組織指數(shù)結(jié)果相一致，驗證中藥抗腫瘤主要通過增強免疫力而發(fā)揮作用。
　　第6章,本章利用CCl4和單次大劑量酒精誘導小鼠肝臟損傷模型，探討救必應提取物對肝損傷小鼠的影響，比較了各給藥組對肝損傷小鼠血清中ALT，AST，肝臟中S

8、OD和MDA活性的影響。本實驗結(jié)果顯示，與模型組比較，救必應提取物均能降低血清中增加的ALT和AST活性及TG濃度，結(jié)果說明，救必應提取物對細胞膜有一定的保護作用。SOD是細胞內(nèi)天然存在的氧自由基清除劑，可以平衡細胞內(nèi)氧化和抗氧化作用，阻止氧化應激作用的發(fā)生，SOD活性的高低反映了機體清除自由基的能力。MDA是脂質(zhì)過氧化反應的產(chǎn)物，MDA濃度的高低可以反映機體細胞膜受自由基破壞的程度。本實驗結(jié)果顯示，救必應給藥組對SOD和MDA均有一定