NO和冷信號(hào)交互作用對(duì)鞘脂代謝及神經(jīng)酰胺酶的調(diào)控作用.pdf

1、鞘脂（sphingolipid）是細(xì)胞膜脂的重要成分，對(duì)于維持細(xì)胞膜正常的流動(dòng)性起到重要作用。作為一種信號(hào)分子，鞘脂參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、衰老和程序性死亡等許多重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程。神經(jīng)酰胺（ceramide）是鞘脂代謝的中心產(chǎn)物，能傳遞凋亡和生長(zhǎng)阻滯，可以被神經(jīng)酰胺酶（ceramidase）水解生成鞘氨醇和脂肪酸。一氧化氮（nitric oxide, NO）是重要的信號(hào)分子，能調(diào)控植物多種生理過(guò)程，延緩果實(shí)衰老，緩解貯藏冷害。植物體

2、內(nèi)存在著NO和冷信號(hào)的交互作用。目前對(duì)于NO調(diào)控果實(shí)冷害的研究主要集中于NO對(duì)冷害的緩解效果和果實(shí)貯藏品質(zhì)影響等方面，對(duì)于果實(shí)細(xì)胞膜脂如何感受冷藏期間的冷信號(hào)以及NO和冷信號(hào)交互作用對(duì)細(xì)胞膜脂組分和代謝的影響等方面研究較少。
　　本實(shí)驗(yàn)以采后肥城桃為材料，提取果實(shí)總蛋白并進(jìn)行同位素標(biāo)記相對(duì)和絕對(duì)定量技術(shù)（iTRAQ）檢測(cè)。結(jié)果顯示，共檢測(cè)到4776個(gè)蛋白質(zhì)，涉及135個(gè)代謝過(guò)程。與外源NO處理相比，儲(chǔ)存溫度的不同更易引起蛋白質(zhì)的表

3、達(dá)差異。COG和GO分析發(fā)現(xiàn)，肥城桃果實(shí)采后貯藏期間，其主要的生理活動(dòng)為蛋白質(zhì)的代謝和糖分的積累。鞘脂代謝過(guò)程共檢測(cè)到31個(gè)蛋白質(zhì)，其中9個(gè)是差異蛋白。這些差異蛋白出現(xiàn)在鞘脂合成初期以及下游代謝過(guò)程，主要是β-半乳糖苷酶和絲氨酸棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶，還包括中性神經(jīng)酰胺酶、3-脫氫鞘氨醇還原酶等。根據(jù)iTRAQ結(jié)果，選擇肥城桃神經(jīng)酰胺酶（Prunus persica ceramidase, PPCDase）為后續(xù)研究的目標(biāo)。采用同源克隆的方法和c

4、DNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)（RACE）克隆獲得了PPCDase基因全長(zhǎng)。該全長(zhǎng)為2784 bp，開(kāi)放閱讀框有2337 bp，共編碼778個(gè)氨基酸。NCBI網(wǎng)站blast結(jié)果和三維結(jié)構(gòu)模擬表明，該基因即是桃中性神經(jīng)酰胺酶基因，且與梅、梨的中性神經(jīng)酰胺酶基因相似度較高。蛋白理化性質(zhì)分析顯示，PPCDase為親水性蛋白，穩(wěn)定性較強(qiáng)；二維結(jié)構(gòu)模擬發(fā)現(xiàn)，PPCDase含有16段α螺旋和25段β折疊結(jié)構(gòu)；亞硝基化預(yù)測(cè)表明，PPCDase內(nèi)部有6個(gè)S-亞