茶多酚對脂代謝基因的調控作用及對人群血壓影響的薈萃分析.pdf

1、第一部分:茶多酚的降脂作用以及長鏈非編碼RNA對脂代謝基因的調控作用
　　目的:冠狀動脈粥樣硬化性心臟病（冠心?。┤匀皇峭{人類健康的重要疾病。血中總膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)濃度的升高，已被確認為冠心病發(fā)生的最主要危險因素。健康的生活方式，如良好的飲食習慣可預防高脂血癥的發(fā)生。綠茶是我國傳統(tǒng)飲品，富含茶多酚，其中茶多酚單體表沒食子兒茶素沒食子酸酯(epigallocatechin gallate，EGCG)是綠茶中

2、最具活性的分子。近年的流行病學研究提示飲用綠茶與心血管疾病死亡風險呈負相關。一些基礎研究表明茶多酚可通過抑制腸道內(nèi)外源性膽固醇的吸收、增加肝臟LDL受體(LDLR)表達及活性、調節(jié)載脂蛋白的分泌等機制調節(jié)血LDL-C水平。但目前茶多酚對脂質代謝通路基因的直接作用以及可能的分子機制仍不清楚。長鏈非編碼RNA(long nocoding RNA，lncRNA)是一類轉錄本長度超過200個核苷酸的RNA分子，能以RNA的形式在多種層面上（表觀

3、遺傳、轉錄以及轉錄后水平）調控基因的表達，參與了劑量補償效應、基因組印記、細胞發(fā)育分化等重要生物學過程。目前越來越多的研究揭示了lncRNA在心臟發(fā)育和心血管疾病（如冠心?。┲邪l(fā)揮了重要作用，已成為心血管領域研究的新熱點。因此，本研究通過生物芯片技術觀察茶多酚EGCG對HepG2細胞脂質代謝通路基因和lncRNAs表達的影響，并初步探討lncRNA對脂質代謝通路基因的調控作用。
　　研究方法:人HepG2細胞經(jīng)茶多酚EGCG(25

4、μM)處理24小時后，抽提RNA，質檢合格后雜交至Human Transcriptome Array2.0(HTA2.0)芯片，進行mRNA和lncRNAs表達譜的分析并篩選出差異表達的基因。篩選標準為倍數(shù)變化(foldchange)≥1.5且P＜0.05。通過生物信息學方法對差異表達的lncRNAs進行靶基因預測，建立lncRNAs和脂代謝相關基因的可能作用關系。為進一步研究lncRNA對靶基因的調控作用，我們利用RNA干擾技術降低相

5、關lncRNA的表達，應用實時熒光定量多聚酶鏈反應和Western blot檢測靶基因的mRNA和蛋白表達水平改變。
　　研究結果:表達譜芯片結果顯示與對照組相比，茶多酚EGCG處理后有27條脂質代謝相關基因表達差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，涉及脂質合成、轉運與分解。其中EGCG可直接影響膽固醇平衡代謝調控的3個關鍵基因:羥甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶(HMGCR)、LDLR及乙酰輔酶A乙酰轉移酶2(ACAT2)的表達水平。同

6、時EGCG處理后共有285條lncRNAs表達水平有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。生物信息學靶基因預測發(fā)現(xiàn)5個脂代謝相關基因包括HMGCR和ACAT2的表達可能受lncRNA的調控，其中l(wèi)ncRNA NONHSAT102202對HMGCR表達可能起著順式調控作用。RNA干擾抑制lncRNA NONHSA T102202的表達后接受不同濃度EGCG(0，10，25μM)處理，HMGCR mRNA和蛋白表達水平均顯著性增高(P＜0.05)。<

7、br>　　結論:茶多酚EGCG可直接影響脂質代謝通路基因的表達，包括在膽固醇平衡調控中起關鍵作用的基因-LDLR，HMGCR和ACAT2。同時EGCG可上調或下調眾多的lncRNA。功能研究證實lncRNA NONHSAT102202可抑制HMGCR的表達。本研究結果提示lncRNAs可能是茶多酚降膽固醇作用的一個重要分子機制。
　　第二部分:茶多酚對血壓影響的薈萃分析
　　目的:高血壓是心血管疾病的重要危險因素。在高血壓防

8、控中，尤其應關注正常高值血壓（收縮壓120-139 mmHg，舒張壓80-89 mmHg）。目前，我國約有3億人為正常高值血壓。正常高值血壓者發(fā)展為高血壓、發(fā)生心血管事件及死于心血管疾病的風險較120/80 mm Hg以下的血壓正常者明顯增高。正常高值血壓在臨床事件發(fā)生之前即可造成亞臨床的心血管靶器官損害，因此需給予積極的干預。目前有關藥物干預的循證依據(jù)不足，而采取生活方式的干預可能更具有公共健康意義。綠茶和紅茶是世界上非常受歡迎的飲品

9、，富含茶多酚，具有抗氧化應激和抗炎癥的作用。本研究旨在系統(tǒng)評價茶多酚的攝入（綠茶或紅茶）對正常高值血壓者或高血壓患者的降壓作用。
　　研究方法:計算機檢索MEDLINE、EMBASE、Cochrane數(shù)據(jù)庫（檢索時間均從建庫至2014年5月），語種限制為英文，全面收集有關茶多酚攝入對血壓影響的隨機對照試驗，并追查所有納入文獻的參考文獻。由兩名評價者獨立選擇研究，進行文獻的逐步篩查，并按照Cochrane系統(tǒng)評價方法，由2名評價者獨

10、立對納入研究的質量進行評價和資料提取。運用加權均數(shù)差(weighted mean difference，WMD)和95％置信區(qū)間(confidential interval，CI)作為血壓前后變化的效應尺度。異質性采用I2和Cochrane Q檢驗，I2＞50％或Q檢驗＜0.1認為存在異質性。若存在異質性，采用隨機效應模型，否則運用固定效應模型進行統(tǒng)計。按照事先定義好的亞組分析探索臨床特征（干預時程、種族、茶的類型、茶多酚的劑量、健康狀

11、況和咖啡因攝入）對茶多酚降壓效應的影響。
　　結果:共納入25篇隨機對照試驗1，476例研究對象。其中6篇評價了茶多酚的即時降壓效應(acute effect)，平均觀察時間為6.8小時;21篇評價了茶多酚的長期效應(long-term effect)，中位觀察時間為12周。薈萃分析顯示茶多酚對收縮壓和舒張壓均無明顯的即時降壓效應（收縮壓，95％CI-0.62，5.46;舒張壓，95％CI-0.01，1.42）。而茶多酚的長期攝入

12、可顯著性地降低收縮壓1.8mmHg(95％CI-2.4，-1.1，I2=17.4％)和舒張壓1.4 mmHg(95％ CI-2.2，-0.6，I2=52.5％)。根據(jù)茶的類型，薈萃分析顯示綠茶可顯著性地降低收縮壓2.1 mmHg(95％ CI-2.9，-1.2，I2=21.8％)和舒張壓1.7 mmHg(95％ CI-2.9，-0.5，I2=59.9％)，紅茶可降低收縮壓1.4 mmHg(95％ CI-2.4，-0.4，I2=9.7％)

13、和舒張壓1.1 mmHg(95％ CI-1.9，-0.2，I2=22.9％)。亞組分析顯示顯示攝入茶多酚≥12周后可更為顯著地降低收縮壓(WMD-2.6[95％ CI-3.5，-1.7] mmHg，I2=0％)和舒張壓(WMD-2.2[95％CI-3.0，-1.3] mmHg，I2=43.3％），而攝入的茶多酚的含量、種族、是否伴隨心血管危險因素以及咖啡因的攝入對茶多酚的降壓效應無明顯作用。
　　結論:長期的茶多酚攝入（≥12周）

14、可顯著降低正常高值血壓者的血壓水平。
　　第三部分:冠脈支架術后應用替格瑞洛對治療后血小板高反應性的影響
　　目的:
　　冠心病是危害人類健康的頭號殺手。我國目前有近4000萬冠心病患者，每年死于冠心病及并發(fā)癥者已超過100萬。目前對冠心病尤其是急性冠脈綜合征的患者(acute coronary syndromes，ACS)治療中，經(jīng)皮冠狀動脈支架植入術（percutaneous coronary interventi

15、on，PCI）是最為行之有效的辦法，極大地挽救了患者的生命。氯吡格雷與阿司匹林聯(lián)合應用已經(jīng)成為PCI術后的標準治療方案，能明顯減少心血管事件的發(fā)生率，降低支架內(nèi)血栓形成的風險。但是，臨床上仍然有2-3％的患者發(fā)生支架內(nèi)血栓事件。這部分患者往往存在氯吡格雷治療后的血小板高反應性(high on-treatment platelet reactivity, HTPR)。大量數(shù)據(jù)證實HTPR與PCI術后主要心血管不良事件(major adve

16、rsecardiovascular events，MACE)發(fā)生有很強的相關性。其中殘余血小板的活性可能是主要關鍵因素之一。
　　替格瑞洛是一種新型的血小板ADP受體P2Y12拮抗劑，與同樣作用于P2Y12受體的氯吡格雷不同，它無需經(jīng)過肝臟代謝，本身已是活性狀態(tài)，能夠更加迅速、強效、持久的血小板抑制作用。PLATO（抑制血小板與患者轉歸）研究表明與氯吡格雷相比，替格瑞洛可顯著降低ACS患者主要復合終點事件（心血管死亡、再發(fā)心梗和卒

17、中）的發(fā)生風險，且不增加總體出血的風險。但是，PLATO研究主要基于國外人群，此外關于替格瑞洛在HTPR患者應用的研究也不多。因此，我們通過隨機對照研究，運用快速血小板功能分析儀(VerifyNow-P2Y12)來評價替格瑞洛對PCI術后HTPR患者的抗血小板作用。并對替格瑞洛的安全性作一初步探討，從而為PCI術后HTPR患者的合理治療提供依據(jù)。
　　方法:
　　連續(xù)入選2014年4月至2015年4月阜外心血管病醫(yī)院12病區(qū)

18、住院經(jīng)冠脈造影確診為冠心病并有介入指征行PCI術的患者。所有患者術前均服用氯吡格雷常規(guī)劑量75mg至少1周或少于一周但給予300mg負荷。根據(jù)血栓彈力圖(Thrombelasography, TEG)進行初篩，當ADP抑制率＜50％且最大聚集幅度MA-ADP＞47mm，高度懷疑為HTPR，并于術后24h內(nèi)采集空腹靜脈血5ml運用VerifyNow-P2Y12系統(tǒng)檢測P2Y12反應單位（P2Y12 reaction unit, PRU），

19、PRU≥235定義為HTPR。將HTPR患者隨機分為氯吡格雷組(150 mg qd)和替格瑞洛組（首次180mg負荷，繼以90mg bid維持），各組分別于服藥后2、8、24 h再次采血運用VerifyNow-P2Y12分析比較兩組對血小板活性的抑制作用。所有患者進行CYP2C19*2基因型鑒定。隨訪1個月，記錄兩組MACE、出血事件及藥物不良反應情況。兩組患者均常規(guī)接受阿司匹林100mg qd。
　　結果:
　　1.本研究

20、共入選465例經(jīng)我院冠脈造影術確診為冠心病(穩(wěn)定型心絞痛或ACS)并行PCI術的患者其中有317例患者術后成功完成了TEG檢測，共有53例懷疑為HTPR。經(jīng)VerifyNow-P2Y12系統(tǒng)檢測為HTPR患者45例，依據(jù)排除標準，最后納入40例，隨機分為氯吡格雷組(n=20)和替格瑞洛組(n=20)。兩組在基線特征方面均無統(tǒng)計學差異，具有良好的可比性。
　　2.兩組服用抗血小板藥物后，均可顯著性地降低血小板殘余活性(PRU)。與氯

21、吡格雷組相比，替格瑞洛對血小板的抑制更為明顯(P＜0.001)。在各個時間點上(2，8，24 h)替格瑞洛均比氯吡格雷更有效地降低PRU水平(P＜0.001)。
　　3.服用替格瑞洛后2h，所有患者PRU位于切點值(235)以下，在8，24 h檢測PRU分別有1例(5％)及3例(15％)患者為HTPR。而氯吡格雷組，2，8，24 h檢測HTPR分別為9例(45％)，8例(40％)，10例(50％)，兩組間HTPR發(fā)生率差異均有統(tǒng)計

22、學差異(P＜0.05)。
　　4.替格瑞洛組9例患者(45％)攜帶至少一個CYP2C19*2能缺失等位基因。在攜帶者和非攜帶者中，替格瑞洛均可顯著降低PRU水平和減少HTPR的發(fā)生率(P＜0.001)。提示CYP2C19*2基因變異不影響替格瑞洛的抗血小板效應。
　　5.隨訪1個月，兩組均未發(fā)生MACE事件。替格瑞洛組有6例發(fā)生輕微出血，主要為皮膚瘀斑。1例發(fā)生小出血，為少量消化道出血。氯吡格雷組有5例輕微出血。兩組在總體出