三羥異黃酮對(duì)脂質(zhì)代謝調(diào)控的研究.pdf

1、肝臟是脂類代謝的主要器官和重要場(chǎng)所，脂肪肝是常見的肝臟疾病之一，形成原因主要是肝細(xì)胞內(nèi)脂肪儲(chǔ)積積累過多、細(xì)胞脂肪化嚴(yán)重，導(dǎo)致脂肪代謝發(fā)生紊亂形成。有人已經(jīng)檢測(cè)出大豆異黃酮對(duì)實(shí)驗(yàn)性大鼠脂肪肝有顯著的治療作用。大豆基異黃酮是從豆科植物根部分離得到的一種天然次級(jí)代謝產(chǎn)物，它具有顯著的抗癌、抑菌、抗氧化等作用。三羥異黃酮(Genistein，Gen)在大豆異黃酮活性功能中發(fā)揮重要作用，研究發(fā)現(xiàn)三羥異黃酮在脂質(zhì)代謝過程中主要通過PPARs過氧化物

2、酶體增殖物激活受體調(diào)控以及對(duì)代謝酶的表達(dá)與活性的調(diào)控發(fā)揮重要生理功能。
　　目的:本文主要通過細(xì)胞體外培養(yǎng)試驗(yàn)來探索三羥異黃酮調(diào)控脂質(zhì)代謝的途徑，研究Gen對(duì)過氧化物酶體增殖物激活受體(PPARs)、肝X受體(LXR)、脂肪甘油三酯脂酶(Adipose Triglyceride lipase，ATGL)、激素敏感性甘油三酯脂肪酶(Hormone-sensitive lipase，HSL)調(diào)控表達(dá)中的規(guī)律，比較三羥異黃酮與PPAR激

3、動(dòng)劑對(duì)細(xì)胞活性的影響，以及探究Gen對(duì)脂肪化細(xì)胞中人腫瘤壞死因子TNF-α、瘦素Leptin的調(diào)控規(guī)律，為三羥異黃酮在營(yíng)養(yǎng)保健、臨床藥理、調(diào)脂保肝等方面提供理論基礎(chǔ)和試驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:實(shí)驗(yàn)對(duì)象為體外培養(yǎng)細(xì)胞模型，培養(yǎng)人體正常肝細(xì)胞L-02、人肝癌細(xì)胞HepG2、Hep3b以及小鼠前脂肪細(xì)胞3T3-L1四種細(xì)胞，將細(xì)胞分為空白組、模型組、Gen試劑組以及PPAR激動(dòng)劑組。首先用MTT測(cè)定細(xì)胞在不同油酸(OA)濃度下的細(xì)胞活性，確

4、定最佳的OA誘導(dǎo)濃度，建立細(xì)胞脂肪化模型。用AnnexinⅤ/PI雙染色法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色處理，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞的凋亡情況;進(jìn)一步驗(yàn)證Gen與PPAR激動(dòng)劑及抑制劑比較對(duì)細(xì)胞的毒性影響;利用Gen、PPAR激活劑及抑制劑處理四種脂肪化細(xì)胞，實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定細(xì)胞內(nèi)ATGL、HSL、PPARα、PPARγ以及肝X受體LXR的mRNA表達(dá)量;酶聯(lián)免疫法檢測(cè)Gen、PPAR激活劑及抑制劑處理后的四種脂變細(xì)胞培養(yǎng)液中的TNF-α、Lepti

5、n含量變化。
　　結(jié)果:(1) MTT細(xì)胞活力測(cè)定實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)油酸濃度高于1mM時(shí)，細(xì)胞活力大幅度降低且部分細(xì)胞漂浮壞死，細(xì)胞內(nèi)TG含量顯著性累積，當(dāng)油酸濃度低于1mM時(shí)，細(xì)胞活力相近，細(xì)胞形態(tài)變化不明顯。(2)流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示，三羥異黃酮對(duì)細(xì)胞脂肪化有保護(hù)作用，能提高細(xì)胞的活性。(3) Gen可以上調(diào)PPARs以及LXRα的mRNA表達(dá)量，其中對(duì)PPARs調(diào)控較LXRα顯著，同時(shí)細(xì)胞中HSL和ATGL的mRNA表達(dá)量也有相應(yīng)

6、的提高。(4) Gen可以呈劑量效應(yīng)調(diào)控TNF-α、Leptin濃度。
　　結(jié)論:使用1mM濃度的OA誘導(dǎo)建立細(xì)胞脂肪化模型較為適宜，Gen與PPAR激動(dòng)劑都能調(diào)節(jié)細(xì)胞的脂質(zhì)代謝活性，調(diào)控細(xì)胞的TG含量。Gen可以通過代謝性核受體途徑調(diào)節(jié)ATGL、HSL的活性，TNF-α、Leptin能夠明顯降低ATGLmRNA的表達(dá)，Gen是通過調(diào)控PPARs途徑來抑制TNF-α、Leptin分泌，調(diào)控體內(nèi)脂質(zhì)代謝產(chǎn)生降脂效果，具有重要的生理意