布氏桿菌生物膜的形成及其特性的初步探究.pdf

1、布氏桿菌病(Brucellosis)是由布氏桿菌（Brucella）引起的一種人獸共患的慢性傳染病。該病可危害全身各個(gè)系統(tǒng)具有潛在的致命性，是一種自然疫源性疾病。布氏桿菌病在世界各地分布廣泛，常常引起不同程度的流行，不但危害畜牧業(yè)的生產(chǎn)發(fā)展，而且嚴(yán)重?fù)p害人類的健康。生物膜是指細(xì)菌為了適應(yīng)周圍不良的生活環(huán)境，吸附于惰性物體或活性實(shí)體表面，迅速生長(zhǎng)繁殖并分泌出大量的多糖基質(zhì)、纖維蛋白、脂蛋白等蛋白多糖復(fù)合物，促使細(xì)菌之間相互黏連成結(jié)構(gòu)性群落

2、的膜樣物質(zhì)，是一種與浮游細(xì)菌相對(duì)應(yīng)的生活方式。生物膜的形成是一個(gè)動(dòng)態(tài)過(guò)程，其主要特征是結(jié)構(gòu)上和生理上的不均質(zhì)性。生物膜的特殊結(jié)構(gòu)促使細(xì)菌可以耐受冷熱、消毒劑和抗生素等而得以生存，造成人和動(dòng)物的持續(xù)感染和重復(fù)感染。因此研究生物膜具有重要的臨床和實(shí)踐意義。
　　本研究首先采用微孔板定量檢測(cè)法測(cè)定布氏桿菌菌株S2生物膜的形成，結(jié)合結(jié)晶紫染色法確定了S2形成生物膜的最佳時(shí)間為6d。隨后通過(guò)試管法、普通顯微鏡觀察法和掃描電子顯微鏡檢測(cè)法觀察

3、布氏桿菌生物膜的形成，結(jié)果顯示:布氏桿菌能夠在試管的氣液交界面上形成生物膜，經(jīng)結(jié)晶紫染色后可以清楚地看到生物膜的形成;普通顯微鏡下可以直接觀察生物膜的結(jié)構(gòu);通過(guò)掃描電子顯微鏡觀察布氏桿菌生物膜的形成過(guò)程，在黏附期細(xì)菌開(kāi)始聚集在一起形成菌落，此時(shí)只有少量的胞外聚合物包裹，所以沒(méi)有形成成熟的生物膜。隨著細(xì)菌大量的生長(zhǎng)繁殖，分泌大量的胞外基質(zhì)，將細(xì)菌緊緊黏連在一起，加厚生物膜的結(jié)構(gòu)。處于成熟期的細(xì)菌生物膜的結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜，掃描電鏡觀察可見(jiàn)片狀或

4、者簇狀的菌落，被細(xì)菌自身所分泌的黏液狀物包裹在一起，形成凹凸不平的致密膜樣結(jié)構(gòu)。細(xì)菌之間相互聯(lián)系，其間可見(jiàn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和水分流動(dòng)以及交換的通道結(jié)構(gòu)，還可以看到一些黏液絲。
　　另外，利用布氏桿菌的敏感抗生素:硫酸鏈霉素、莫西沙星、硫酸慶大霉素和卡那霉素，測(cè)定其對(duì)布氏桿菌生物膜態(tài)和浮游態(tài)的最小殺菌濃度(MBC)。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中首先要利用96孔細(xì)胞板培養(yǎng)法誘導(dǎo)細(xì)菌形成生物膜，然后再去測(cè)量抗生素對(duì)生物膜態(tài)細(xì)菌的最小殺菌濃度。對(duì)比發(fā)現(xiàn)，在這四種抗