高濃度葡萄糖對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌生物膜形成能力的影響.pdf

1、鮑曼不動(dòng)桿菌（Acinetobacterbaumannii）是一種非發(fā)酵革蘭陰性桿菌，廣泛存在于自然界及醫(yī)院環(huán)境中，屬于條件致病菌，能引起一系列院內(nèi)感染，如獲得性肺炎、泌尿系統(tǒng)感染、敗血癥、繼發(fā)性腦膜炎、創(chuàng)傷感染等，嚴(yán)重威脅著患者的生命。近年來，隨著廣譜抗生素，尤其是耐碳青霉烯類的廣泛應(yīng)用以及醫(yī)療置入物的增多，鮑曼不動(dòng)桿菌引起的嚴(yán)重院內(nèi)感染日趨嚴(yán)重，其感染的發(fā)病率和病死率也迅速上升。長期以來，人們對(duì)細(xì)菌的認(rèn)識(shí)主要通過浮游的個(gè)體菌，然而近

2、年來的研究表明，細(xì)菌主要是通過生物膜的形式附著于物體表面維系其生存。同時(shí)，國外有研究證實(shí)，高濃度葡萄糖能明顯誘導(dǎo)細(xì)菌生物膜的形成。而由生物膜引起的感染卻是鮑曼不動(dòng)桿菌致病的重要原因。因此，研究高濃度葡萄糖對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌生物膜形成的影響，將為防治其所致的感染提供有效的思路和方法。
　　本實(shí)驗(yàn)收集某院鮑曼不動(dòng)桿菌30株，用瓊脂稀釋法測(cè)定其耐藥性；用結(jié)晶紫染色法半定量測(cè)定其形成生物膜的能力，從中篩選出能形成生物膜的鮑曼不動(dòng)桿菌，用不同濃

3、度葡萄糖對(duì)其進(jìn)行培養(yǎng)，同樣采用結(jié)晶紫染色法進(jìn)行測(cè)定，分析高濃度葡萄糖對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌生物膜形成的影響；采用激光掃描共聚焦顯微鏡對(duì)其中三株形成生物膜能力為強(qiáng)陽性的鮑曼不動(dòng)桿菌進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，進(jìn)一步觀察在不同濃度葡萄糖培養(yǎng)條件和不同時(shí)間點(diǎn)下，高濃度葡萄糖對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌生物膜形成的影響。
　　一、鮑曼不動(dòng)桿菌生物膜形成能力與其耐藥率關(guān)系的研究
　　采用結(jié)晶紫染色法對(duì)30株鮑曼不動(dòng)桿菌進(jìn)行定量分析。以不同濃度葡萄糖培養(yǎng)此30株鮑曼不動(dòng)桿

4、菌作為實(shí)驗(yàn)組，同時(shí)設(shè)不加糖條件下培養(yǎng)的鮑曼不動(dòng)桿菌為對(duì)照組。將陰性對(duì)照的平均A570值加標(biāo)準(zhǔn)差定義為Ac,用待測(cè)菌株3個(gè)復(fù)孔（A570）的平均值與Ac比較,則菌株生物膜形成能力可以分為四類:陰性(-):無生物膜形成,A≤Ac;弱陽性(+):Ac4×Ac。采用以上標(biāo)準(zhǔn)得出結(jié)果顯示，該30株鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離株均具有生物被膜形成能力且形成試驗(yàn)均為強(qiáng)陽性。

5、>　　利用瓊脂倍比稀釋法測(cè)定氨曲南注射液、頭孢他啶注射液、哌拉西林、哌拉西林/舒巴坦、左氧氟沙星、頭孢哌酮/舒巴坦、美羅培南、阿米卡星對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌的最低抑菌濃度（MIC）。結(jié)果顯示30株鮑曼不動(dòng)桿菌臨床分離株對(duì)頭孢他啶、哌拉西林、阿米卡星的耐藥率均為96.6％（29/30），頭孢哌酮/舒巴坦、美羅培南的耐藥率均為86.7%(26/30)，哌拉西林/舒巴坦、左氧氟沙星的耐藥率分別為93.9%（28/30）、63.6%(19/30)。因此

6、，該30株鮑曼不動(dòng)桿菌均具有較強(qiáng)的生物膜形成能力，且具有多重耐藥性。
　　二、高濃度葡萄糖對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌生物膜形成能力的影響
　　首先對(duì)30株鮑曼不動(dòng)桿菌的標(biāo)本分布進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn)多數(shù)以老年患者居多（36.7%），標(biāo)本類型主要為痰標(biāo)本（76.7%），患者所在科室主要集中在神經(jīng)外科（36.7%）、骨科（13.3%）、ICU（13.3%）和SICU（10%）等。
　　對(duì)上述30株生物膜形成能力為強(qiáng)陽性的鮑曼不動(dòng)桿菌用不同濃度

7、葡萄糖（5、7、11.1、16.7、20、30mmol/l）培養(yǎng)，同樣采用結(jié)晶紫染色法對(duì)其形成的生物膜進(jìn)行半定量檢測(cè)。半定量實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析顯示，隨著葡萄糖濃度的增加，其吸光度呈上升趨勢(shì)，在11.1mmol/L以后形成的生物膜要比不加糖條件下形成的生物膜多（p<0.05），并且在葡萄糖濃度為11.1mmol/l之后各組吸光度值無差異（p>0.05），呈平緩趨勢(shì)。這說明高濃度葡萄糖能明顯誘導(dǎo)鮑曼不動(dòng)桿菌生物膜的形成。
　　三、激光

8、共聚焦顯微鏡觀察高濃度葡萄糖對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌生物膜形成的影響
　　從30株鮑曼不動(dòng)桿菌中挑選出生物膜形成能力最強(qiáng)的三株鮑曼不動(dòng)桿菌為研究對(duì)象，采用不同濃度葡萄糖培養(yǎng)，在蓋玻片上形成生物膜，分別于接種后12、24、36、48、60和72h取出玻片，采用免疫熒光技術(shù)標(biāo)記細(xì)菌和多糖，激光掃描共聚焦顯微鏡（CLSM）觀察鮑曼不動(dòng)桿菌生物膜形成的動(dòng)態(tài)過程，并測(cè)定其生物膜的厚度。
　　用CLSM觀察顯示，當(dāng)葡萄糖濃度≥11.1mmol/L