鮑曼不動桿菌體外聯(lián)合藥敏實驗及生物膜形成能力與耐藥性相關性研究.pdf

1、目的:通過分析來自中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院感染患者標本的鮑曼不動桿菌的耐藥情況以及聯(lián)合應用抗菌藥物，篩選出優(yōu)化的治療方案，為廣泛耐藥鮑曼不動桿菌感染制定有效治療方法，為臨床合理應用抗菌藥物提供有效依據。通過結晶紫染色法和藥敏試驗分析鮑曼不動桿菌生物膜形成能力與其耐藥性的關系，探討生物膜在鮑曼不動桿菌耐藥機制中可能發(fā)揮的作用，參考聯(lián)合藥物實驗的結果，確定單獨或聯(lián)合應用抗菌藥物對鮑曼不動桿菌生物膜合成的抑制作用，以期通過選擇有效的單獨或聯(lián)合

2、用藥方案抑制鮑曼不動桿菌生物膜的合成，降低鮑曼不動桿菌的耐藥性，提高抗菌藥物的敏感性。
　　方法:收集2013-2014年我院住院患者的標本，整理臨床資料，對收集的標本進行細菌培養(yǎng)和分離，篩選出50株臨床資料完善的鮑曼不動桿菌，采用美國臨床和實驗室標準協(xié)會(CLSI)推薦的瓊脂二倍稀釋法測定抗菌藥物的MIC值，根據《中國鮑曼不動桿菌感染診治與防控專家共識》和《中國鮑曼不動桿菌感染診治與防控專家共識解讀》選擇常用藥物，并根據CLSI

3、2012年頒布的抗菌藥物臨界濃度標準進行耐藥性分析。在耐藥性分析的基礎上，篩選出40株多重耐藥鮑曼不動桿菌分離株，根據美國鮑曼不動桿菌診治指南（2015年）、《中國鮑曼不動桿菌感染診治與防控專家共識》、《中國鮑曼不動桿菌感染診治與防控專家共識解讀》分別測定了7種抗菌藥物和5種聯(lián)合用藥方案的藥敏試驗，比較了聯(lián)合用藥與單獨用藥的抑菌效果。按Stepanovic等的方法稍加改良，采用96孔板結晶紫染色法檢測檢測了40株多重耐藥鮑曼不動桿菌分離

4、株生物膜形成能力。在耐藥性分析的基礎上，對多重耐藥鮑曼不動桿菌的耐藥性與其生物膜形成能力的關系進行了分析，同時研究不同抗菌藥物對鮑曼不動桿菌生物膜合成的抑制作用。
　　結果:本實驗包括兩部分，第一部分結果顯示:2013-2014年共分離出臨床資料完善的50株鮑曼不動桿菌，主要分布在重癥監(jiān)護室(ICU)、神經外科和普外科。50株鮑曼不動桿菌根據藥敏值被分成，非多重耐藥鮑曼不動桿菌（non-multidrug-resistant Ac

5、inetobacter baumannii，non-MDRAB）10株、多重耐藥鮑曼不動桿菌(multidrug-resistant Acinetobacter baumannii，MDRAB)40株，其中40株多重耐藥鮑曼不動桿菌中包括廣泛耐藥鮑曼不動桿菌(extensively-drugresistant Acinetobacter baumannii，XDRAB)10株。這些鮑曼不動桿菌分離株對米諾環(huán)素、替加環(huán)素耐藥率最低，均為0

6、，多粘菌素2年的耐藥率分別為20％和16％。其他抗菌藥物耐藥率均在50％以上。左氧氟沙星的耐藥率為56％和64％。2014年頭孢哌酮/舒巴坦(2∶1)和2013年亞胺培南的耐藥率均為96％，為各種抗菌藥物耐藥率之最高值。聯(lián)合應用抗菌藥物的結果顯示:在替加環(huán)素+頭孢哌酮舒巴坦組中，協(xié)同作用占7.5％，相加作用占30％，無關作用占62.5％;多粘菌素+米諾環(huán)素組中，協(xié)同作用占22.5％，相加作用占27.5％，無關作用占50％;多粘菌素+亞胺

7、培南組中，協(xié)同作用占55％，相加作用22.50％，無關作用占22.5％;多粘菌素+多尼培南組中，協(xié)同作用占12.5％，相加作用占67.5％，無關作用占20％;替加環(huán)素+亞胺培南組中，協(xié)同作用占32.5％，相加作用占40％，無關作用占27.5％。本實驗未發(fā)現(xiàn)拮抗現(xiàn)象。30株（除去廣泛耐藥鮑曼不動桿菌）多重耐藥鮑曼不動桿菌的單用和聯(lián)合應用抗菌藥物的結果顯示:聯(lián)合用藥組的MIC值與相應單用藥物MIC值相比均有下降，經過統(tǒng)計學分析，其差異非常顯

8、著（P值均小于0.01），具有統(tǒng)計學意義（P值均小于0.01）。對10株廣泛耐藥鮑曼不動桿菌的單用和聯(lián)合應用抗菌藥物的結果顯示:除了替加環(huán)素+頭孢哌酮/舒巴坦組中的替加環(huán)素的MIC值與單用替加環(huán)素的MIC值相比，P值大于0.05，無統(tǒng)計學意義，而其它聯(lián)合用藥組合的MIC值均比相應的單獨用藥MIC值有所下降，其差異非常顯著(P值均小于0.01)，具有統(tǒng)計學意義。
　　第二部分實驗結果顯示:40株多重耐藥鮑曼不動桿菌分離株中，95％的

9、菌株具有生物膜形成能力，其中形成能力中等和強陽性的菌株分別為32.5％和45％，兩者之和占總樣本的77.5％。對阿米卡星和左氧氟沙星耐藥的鮑曼不動桿菌株數(shù)隨著生物膜形成能力的增強而增加，其差異有統(tǒng)計學意義（阿米卡星為P＜0.01，左氧氟沙星為P＜0.05）。多粘菌素，替加環(huán)素，亞胺培南單獨或聯(lián)合作用均具有抑制鮑曼不動桿菌生物膜合成的作用。在單一藥物的試驗中，多粘菌素的抑制作用最強，其生物膜下降率為53.83％。亞胺培南的抑制作用最弱，其

10、生物膜下降率僅為25.46％。但是在聯(lián)合用藥中，無論是多粘菌素+亞胺培南還是替加環(huán)素+亞胺培南對生物膜合成抑制作用都比單用多粘菌素或替加環(huán)素大，分別為62.12％和62.88％，說明亞胺培南與多粘菌素或替加環(huán)素合用對于鮑曼不動桿菌的生物膜合成的抑制作用比單獨用藥更加明顯。
　　結論:通過實驗我們得出以下結論:
　　1.我院2013-2014年檢出的50株鮑曼不動桿菌體外藥敏結果提示，替加環(huán)素、米諾環(huán)素均100％敏感，多粘菌素

11、國內雖未上市，臨床分離菌株已經出現(xiàn)耐藥，但敏感率為82％，處于較高水平;阿米卡星、亞胺培南耐藥率較高，分別達到56％和90％，與國內資料一致;頭孢哌酮/舒巴坦(1∶1)在對鮑曼不動桿菌的治療上優(yōu)于頭孢哌酮/舒巴坦(2∶1)，但整體耐藥性也較高。
　　2.參考國內鮑曼不動桿菌感染診治專家共識及解讀內容與美國鮑曼不動桿菌診治指南（2015年）的相關推薦方案，我們采用5組聯(lián)合用藥方案:替加環(huán)素+頭孢哌酮/舒巴坦;多粘菌素+米諾環(huán)素;多粘

12、菌素+亞胺培南;多粘菌素+多尼培南;替加環(huán)素+亞胺培南。其中，多粘菌素+亞胺培南組，替加環(huán)素+亞胺培南組與其他聯(lián)合用藥組相比FIC值更低，表現(xiàn)出更好的協(xié)同作用。
　　3.對其中的40株多重耐藥鮑曼不動桿菌分離株進行的生物膜形成實驗結果進一步證實，大部分MDR菌株(95％)可以形成生物膜，且生物膜形成能力與部分抗菌藥物（包括阿米卡星，左氧氟沙星）耐藥性之間存在較明顯的正相關性。
　　4.生物膜抑制實驗結果證實:單獨應用替加環(huán)素