石榴皮提取物鞣質(zhì)對鮑曼不動桿菌生物膜的影響.pdf

1、目的：探討石榴皮提取物鞣質(zhì)對鮑曼不動桿菌（Acinetobacter baumannii，Ab）生物膜的形成以及已形成的生物膜的影響，為臨床Ab生物膜相關(guān)感染的治療提供理論及實驗依據(jù)。
　　方法：1.采用肉湯稀釋法分別測定石榴皮丙酮提取物鞣質(zhì)和環(huán)丙沙星（ciprofloxacin， CIP）對Ab ATCC19606最低抑菌濃度（minimum inhibitory concentration，MIC）。2.采用結(jié)晶紫染色法測定1

2、/2MIC、1/4MIC、1/8MIC的鞣質(zhì)作用于Ab4h、8h、24h、48h后的光密度值；再將上述不同濃度鞣質(zhì)作用Ab48h，在熒光顯微鏡下，觀察鞣質(zhì)對Ab生物膜形成的影響。3.分別配制1/2MIC、1MIC、2MIC濃度的鞣質(zhì)和CIP，將兩藥單獨及聯(lián)合作用已形成的Ab生物膜4h、8h、24h、48h，采用結(jié)晶紫染色法及平板菌落計數(shù)法分別測定光密度值和菌落數(shù)；再將上述不同濃度鞣質(zhì)作用已形成的Ab生物膜24h，分別在熒光顯微鏡和激光共

3、聚焦顯微鏡（confocal Laser Scanning Micro-scope，CLSM）下，觀察鞣質(zhì)對已形成的Ab生物膜的影響。4.采用實時熒光定量PCR（fluorescent quantitative PCR，F(xiàn)Q-PCR）檢測鞣質(zhì)和CIP單獨及聯(lián)合干預(yù)生物膜相關(guān)基因自誘導(dǎo)合成酶基因(AbaI)、生物膜相關(guān)蛋白基因(Bap)、粘附素因子基因(CsuE)、外膜孔蛋白A基因(OmpA)的影響。
　　結(jié)果：1.石榴皮提取物鞣質(zhì)

4、和CIP對Ab ATCC19606的MIC分別為1.95 mg/mL、0.50 mg/mL。2.鞣質(zhì)對Ab生物膜形成的影響：1/2MIC、1/4MIC、1/8MIC濃度鞣質(zhì)作用于Ab4h、8h、24h、48h后，對生物膜的形成均有抑制作用，但在48h時抑制效果最好，且當(dāng)濃度由1/4MIC增加到1/2MIC時，其光密度值降低達2倍；在鞣質(zhì)作用48h后，經(jīng)熒光染色后，在熒光顯微鏡觀察隨著鞣質(zhì)濃度增大對生物膜形成的抑制效果增強，且1/2MIC

5、鞣質(zhì)濃度時，熒光顯微鏡見少量稀薄點狀綠色熒光。3.鞣質(zhì)和CIP單獨及聯(lián)合干預(yù)對已形成的Ab生物膜的影響：1/2MIC、1MIC、2MIC濃度的鞣質(zhì)和CIP單獨及聯(lián)合作用于已形成的Ab生物膜4h、8h、24h、48h后，結(jié)果顯示單獨用藥不如聯(lián)合用藥效果好，且聯(lián)用時以2MIC（鞣質(zhì)+CIP）作用24h效果最好，其光密度值(0.40±0.17)較空白組(2.20±0.42)下降；菌落計數(shù)(12±5)×106CFU/mL較空白組(153±20)

6、×106CFU/mL下降；熒光顯微鏡下僅見稀薄綠色熒光；CLSM下見大量紅色熒光。4. FQ-PCR檢測鞣質(zhì)和CIP單獨及聯(lián)合干預(yù)對已形成的Ab生物膜相關(guān)基因AbaI、Bap表達上調(diào)，OmpA、CsuE基因表達下調(diào)。
　　結(jié)論：1.石榴皮提取物鞣質(zhì)對Ab生物膜形成有一定的抑制作用，在本實驗劑量范圍內(nèi)，隨著濃度增大其效果增強，1/2MIC鞣質(zhì)能抑制>50％的生物膜量形成；2.石榴皮提取物鞣質(zhì)或CIP單獨作用對已形成的Ab生物膜的影響