注射用柿葉總黃酮粉針的研究.pdf

1、本課題參考德國(guó)威瑪舒培大藥房生產(chǎn)的銀杏黃酮注射液(商品名:金納多)及廣州白云山制藥廠生產(chǎn)的以柿葉黃酮為有效成分的腦心清片的處方及諸多相關(guān)文獻(xiàn),將柿葉總黃酮粗提物進(jìn)行分離純化,制備成可用于注射的干燥中間體；且對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量研究并建立相應(yīng)專屬性質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；以制得的中間體為原料,篩選出合適的處方和冷凍干燥工藝,制備注射用柿葉總黃酮粉針；制定準(zhǔn)確、嚴(yán)格的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)從而有效控制產(chǎn)品質(zhì)量；并考察了注射用柿葉總黃酮的一般安全性,以保證臨床用藥的安全。

2、>　　 首先,建立柿葉總黃酮類物質(zhì)的化學(xué)反應(yīng)顯色鑒別方法；采用紫外-可見(jiàn)分光光度法及高效液相色譜法對(duì)柿葉總黃酮粗提物、中間體及制劑的有效成分的含量進(jìn)行了測(cè)定,并建立了相應(yīng)的指標(biāo)成分分析方法；采用氣相色譜法對(duì)中間體的有機(jī)殘留進(jìn)行考察,并建立了相應(yīng)分分析方法。
　　 針對(duì)注射劑對(duì)有效成分的純度及工業(yè)化生產(chǎn)規(guī)模的要求,采用單因素考察及正交設(shè)計(jì)試驗(yàn),以有效成分(柿葉總黃酮)的純度為指標(biāo),分別對(duì)大孔樹(shù)脂的種類、影響吸附的溫度、上樣濃度及

3、pH,動(dòng)態(tài)吸附的流速,上樣量,洗脫液的種類及洗脫方式進(jìn)行了考察,并對(duì)純化工藝進(jìn)行了篩選與優(yōu)化,最終選用了AB-8大孔吸附樹(shù)脂,上樣控制藥液中總黃酮濃度為0.06 g·L-1,pH為5.0,溫度為25℃,以5倍柱體積的30％乙醇溶液除雜,體積分?jǐn)?shù)為50％乙醇溶液流速為2～3 mL·min-1洗脫5倍柱體積,洗脫液濃縮后真空干燥,得到易于工業(yè)化生產(chǎn)的注射級(jí)中間體的制備工藝。高效液相色譜法測(cè)定三批中試樣品的中間體中總黃酮的純度均大于70％,三

4、批中試樣品的總黃酮轉(zhuǎn)移率大于60％。
　　 通過(guò)處方篩選,支撐劑、活性炭用法用量的考察,以外觀、含水量、復(fù)溶性及總黃酮的損失率為評(píng)價(jià)指標(biāo),確立了柿葉總黃酮5mg/瓶、甘露醇作為支撐劑(250mg/瓶)、活性炭的用量為0.1％(W/V)、溫水浴(50～60℃)加熱攪拌30分鐘除熱源的凍干原液處方工藝；利用熱分析法測(cè)定了凍干原液的最低共熔點(diǎn)為-1.2℃,繪制出柿葉總黃酮粉針的凍干曲線,并確定了合理的冷凍干燥工藝參數(shù)。配伍相容性試驗(yàn)結(jié)

5、果表明本品和生理鹽水注射液,5.0％葡萄糖注射液配伍相容性良好(24h)。
　　 對(duì)注射用柿葉總黃酮粉針進(jìn)行質(zhì)量研究,結(jié)果表明該產(chǎn)品符合中藥注射用無(wú)菌制品的質(zhì)量要求,并建立專屬性質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),以有效控制產(chǎn)品質(zhì)量,保證臨床用藥的安全。
　　 運(yùn)用高效液相色譜法測(cè)定了樣品水解液中槲皮素及山奈酚的含量,并利用經(jīng)驗(yàn)公式:總黃酮=槲皮素×2.55+山奈素×2.59計(jì)算了樣品中總黃酮的含量,每瓶柿葉黃酮粉針中總黃酮的含量在4.90～5.

6、10mg之間,符合要求。建立了成品制劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)系統(tǒng)。其研究?jī)?nèi)容包括:性狀、化學(xué)反應(yīng)鑒別法(黃酮類物質(zhì))、一般檢查(裝量差異、可見(jiàn)異物、pH、水分、鞣質(zhì)、蛋白質(zhì)等)；分別對(duì)注射用柿葉總黃酮粉針的急性毒性、體外溶血和血管刺激性進(jìn)行了考察。小鼠急性毒性試驗(yàn)中,當(dāng)藥物以最大允許濃度和最大允許容量給予動(dòng)物時(shí),仍未測(cè)出LD50,因此為進(jìn)一步研究其安全性,測(cè)定最大耐受量(MTD),結(jié)果表明小鼠腹腔注射給予注射用柿葉總黃酮溶液的最大給藥量為0.25g