苦豆子抗內(nèi)毒素效應的實驗研究.pdf

1、目的：研究苦豆子中提取的苦豆子總堿及氧化苦參堿、槐定堿、槐果堿的體外拮抗內(nèi)毒素（Endotoxin, ET），即脂多糖（Lipopolysaccharide, LPS）的作用，并制備小鼠內(nèi)毒素肺損傷模型，初步觀察四種生物堿對內(nèi)毒素肺損傷小鼠模型的干預作用及其作用機制。 方法：以清開靈注射液作為實驗的陽性對照藥物。鱟試劑顯色基質(zhì)法進行苦豆子總堿和3種單體堿的體外拮抗內(nèi)毒素作用研究。ICR小鼠腹腔注射內(nèi)毒素，制備內(nèi)毒素肺損傷小鼠模

2、型，觀察預防性腹腔注射給予苦豆子總堿25mg/kg、槐果堿25mg/kg、槐定堿5mg/kg和氧化苦參堿50mg/kg后的模型鼠一般狀況，計數(shù)外周血白細胞（white blood cell，WBC）總數(shù)，以肺組織濕重/干重（wet/dry weight ratio，W/D）比值檢測肺水含量，肉眼及光鏡觀察肺組織及其切片病理變化；用免疫組織化學法檢測肺組織CD14( Cluster of Differentiation 14 , CD14

3、 )和清道夫受體( scavenger receptor A ，SR-A )的表達；用放射免疫分析法檢測血清腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor α，TNF-α）、白細胞介素-6（Interleukin-6，IL-6）含量。 結(jié)果：（1）體外實驗：四種苦豆子生物堿均有降解內(nèi)毒素作用，槐果堿濃度為1.25μg/mL、槐定堿5μg/mL、苦豆子總堿40μg/mL、均可顯著降低LPS濃度，降解率分別為79.04％

4、、79.34％、77.20％，氧化苦參堿125μg/mL時可降解44.68％ LPS。四種苦豆子生物堿對LPS的降解率在一定范圍內(nèi)呈劑量依賴性。（2）LPS ( E.coli O55:B5 ) 6 mg/kg、9 mg/kg、12 mg/kg、18 mg/kg四個劑量組均引起小鼠內(nèi)毒素性肺損傷，并隨LPS劑量增加，肺損傷加重；模型鼠肺組織CD14 表達上調(diào)，SR-A相反，二者之間有負相關性 ( P<0.01 )；模型鼠血清中TNF-α和

5、 IL-6含量顯著增加。（3）四種苦豆子生物堿和清開靈腹腔預防性給藥均不同程度地改善了內(nèi)毒素肺損傷小鼠模型的一般狀況，減輕了肺組織病理改變；槐定堿、槐果堿和清開靈顯著升高模型鼠外周血白細胞總數(shù)（P<0.05 ）；槐定堿、苦豆子總堿和氧化苦參堿還可顯著降低肺組織 W/D 比值。（4）四種苦豆子生物堿和清開靈均可顯著降低肺組織 CD14 的表達（P<0.05 )，并顯著增強 SR-A表達。（5）槐定堿和氧化苦參堿可顯著降低血清 TNF-α水

6、平（P<0.05）；二者與槐果堿還可顯著降低血清IL-6水平（P <0.05 )。 結(jié)論：（1）苦豆子總堿、槐果堿、槐定堿、氧化苦參堿在體外具有直接降解溶液中LPS 作用，槐果堿濃度為1.25μg/ml、槐定堿5μg/ml、苦豆子總堿40μg/ml均可顯著降低 LPS 濃度，降解率分別為79.04％、79.34％、77.20％；氧化苦參堿125μg/ml時可降解44.68％ LPS；（2）預防性給予內(nèi)毒素肺損傷小鼠苦豆子總堿和

7、三種苦豆子單體堿，均不同程度改善了模型鼠的一般狀況，并可升高外周血白細胞，降低肺臟 W/D 比值，減輕肺組織病理改變，綜合各項療效指標，在本實驗條件下以槐定堿的療效較為顯著；（3）苦豆子總堿和三種苦豆子單體堿可不同程度地降低模型鼠肺組織 CD14 表達，增加 SR-A 表達，并降低血清中TNF-α和 IL-6 的水平，表明苦豆子總堿和三種苦豆子單體堿的抗內(nèi)毒素機制與調(diào)節(jié) LPS的識別受體，并進而影響下游炎癥因子表達有關；（4）在本研究條