珍珠黃楊的同工酶與ISSR指紋圖譜分析.pdf

1、珍珠黃楊(Buxus sinica var.parvifolia)是我國特有的國家二級(jí)保護(hù)樹種，因其分布范圍狹小，近年來又被大量挖掘作盆景栽培，資源已瀕于絕滅，為了進(jìn)一步研究其親緣關(guān)系，有效地保護(hù)和利用這一優(yōu)良的種質(zhì)資源，本文采用過氧化物酶同工酶(POD)標(biāo)記技術(shù)和ISSR標(biāo)記技術(shù)，并輔以形態(tài)標(biāo)記對(duì)選育出的珍珠黃楊無性系進(jìn)行指紋圖譜分析，主要結(jié)論如下： 1、珍珠黃楊各無性系經(jīng)POD同工酶電泳后條帶數(shù)少，只有4條，并且多態(tài)性不強(qiáng)，

2、雖然能根據(jù)酶譜染色深淺來區(qū)別各個(gè)無性系，但是其可能受實(shí)驗(yàn)操作影響較大，因此難以正確體現(xiàn)珍珠黃楊無性系之間的差異。 2、為從珍珠黃楊幼葉中提取高質(zhì)量的總DNA，比較了4種DNA提取方法，結(jié)果表明：2％(W/V)濃度的CTAB 提取緩沖液所提DNA效果最好；并在此基礎(chǔ)上，以(CT)<,8>G為引物，采用單因素實(shí)驗(yàn)法，確立了適合珍珠黃楊的ISSR-PCR反應(yīng)體系：在總體積20μl 的反應(yīng)體系中，含30ngDNA 模板，2.0mmol/

3、L Mg2<'+>，0.30μmol/L引物，0.20 mmol/L dNTPs，1U Taq DNA 酶。 3、從100條ISSR 引物中篩選出19條多態(tài)性較強(qiáng)的引物，擴(kuò)增出256條條帶，其中211條是多態(tài)帶，多態(tài)率達(dá)到82.4％，每條引物平均擴(kuò)增出13.5條條帶。其中引物 UBC848 擴(kuò)增的結(jié)果顯示每個(gè)供試材料的擴(kuò)增條帶都不一樣，因此運(yùn)用這一引物就能將所有的供試材料區(qū)分開來。 4、將同工酶標(biāo)記的酶譜、ISSR 標(biāo)記